高瑞雪,李超群,张耀刚,李凤辉,赵 婧,姜博璠,张发斌*

    (1.青海大学医学院,青海西宁810001;2.青海省包虫病研究重点实验室,青海西宁810001)

    近年来,利用基因工程技术分析细粒棘球绦虫的有效成分,寻找特异性高的抗原分子成为细粒棘球蚴病早期诊断的研究热点[1-2]。细粒棘球绦虫肌动蛋白基因是一种用患者血清从细粒棘球蚴原头节蛋白中筛选出的抗原性蛋白[3,4]。本研究拟通过克隆表达细粒棘球绦虫肌动蛋白基因获得纯化蛋白。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    cDNA由青海省包虫病研究重点实验室提供。实验所需的表达载体PET28a-SUMO,限制性内切酶BamHI、Xhol,镍柱(1mL),兔抗His标签抗体IgG,羊抗兔抗体IgG由上海生物工程有限公司提供。DNA凝胶回收试剂盒、T4连接酶、质粒提取试剂盒由天根生物技术有限公司提供。

    1.2 方法

    1.2.1 EgACT基因的合成

    在GenBank数据库中获取EgACT基因编码序列,经全序列合成、密码子优化后合成目的基因。合成产物经1%琼脂凝胶电泳后在紫外光下切取目的基因,并用DNA凝胶回收试剂盒纯化回收DNA。

    1.2.2 重组质粒的构建[5]

    依据参考文献方法回收产物与原核表达质粒pET28a-SUMO,采用限制性内切酶 BamHI、Xhol进行双酶切 ......