急性低压低氧对大鼠血脑屏障相关连接蛋白和通透性的影响※
货号,材料与方法,1实验动物,2实验试剂与仪器,3PCR引物序列,4实验方法,5统计学方法,结果,1脑含水量测定结果,2血脑屏障通透性测定结果,3相关基因mRNA的表达量检测结果,4AQP4,Occlud
马倩倩,张 昱,申香群,朱沁芳,杜忠蕾,Muhammad Shoaib Tahir,周义玲,袁周阳,刘 杰,汪晓洲,张 伟*(1.青海大学医学院,青海 西宁 810001;2.青海省高原医学应用基础重点实验室,青海 西宁 810001;3.青海大学附属医院,青海 西宁 810001;4.四川大学华西医院,四川 成都 610041)
低压低氧对人体各系统有显著的损害性影响,尤以中枢神经系统为重。研究表明,Claudin-5、Occludin和ZO-1是目前公认的紧密连接相关蛋白,这些蛋白的改变直接影响血脑屏障的结构和功能。Tetsuhiro等人[1]在小鼠脑创伤的模型中发现,脑组织中的HIF-1α表达上调可引起AQP4的表达上调致BBB通透性的增加。本研究通过研究急性低压低氧对大鼠脑组织的HIF-1α、AQP4和紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达和形态学变化,探讨急性低压低氧对大鼠血脑屏障相关连接蛋白和通透性的影响。
1.材料与方法
1.1 实验动物
8周龄健康雄性SD大鼠48只,体重200±20 g,由西安交通大学医学部实验动物中心提供,许可证号:SCXK(陕)2018-001。动物的使用和处理经青海大学医学院实验动物伦理委员会批准。大鼠饲养在青海大学医学院动物房,饲养环境:海拔2 260 m(574mmHg,PO2120.1mmHg),清洁级,温度为(20±2)℃,相对湿度为(40±5)%;昼/夜交替(12:12);自由摄取标准维持颗粒饲料(北京科澳协力饲料有限公司)和水。适应性喂养一周后,随机分为正常对照组和7000m低压低氧24、48、72h组,对照组大鼠不做任何处理,其余3组大鼠放入低压舱(模拟海拔7000m,305mmHg,PO263.7mmHg)。
1.2 实验试剂与仪器
Evens Blue(Sigma,货号:E2129),甲酰胺(Sigma,货号:V900064),H.E.染色试剂盒(Solarbio,货号:G1120),PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Takara,货号:RR047A),TB GreenTMPremix EX TaqTMⅡ(Takara,货号:RR820A),Anti-beta Actin antibody(Abcam,货号:ab115777),Anti-Aquaporin 4 antibody(Abcam,货号:ab46182) ......
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