周 培，辛明远，马敬为，胡缤文，王 蕾，魏 威，冯 琳，周 振，刘文婧，李润乐，汤 锋

    (1.青海大学高原医学研究中心，青海省高原医学应用基础重点实验室，青海 西宁 810001；2.青海大学研究生院，青海 西宁 810001；3.青海大学基础医学部，青海 西宁 810016)

    目前尚未发现单一的抗原可以有效预防泡型包虫病(Alveolar Echinococcosis，AE)，找到一种可以诱导机体对各阶段多房棘球绦虫产生免疫应答的抗原肽是研制AE疫苗亟需解决的问题。故本研究在课题组前期研究(多房棘球绦虫EmEMY162、EmLAP的优势抗原表位鉴定)的基础上，设计、构建多房棘球绦虫多表位疫苗GILE，并表达、纯化该重组蛋白。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    pCzn1质粒(钟鼎生物公司)，Artic express表达菌株(钟鼎生物公司)，限制性内切酶(TaKaRa公司)，蛋白质Marker(Thermo公司)，IPTG(Biotopped公司)，氨苄青霉素钠(Solarbio公司)，透析袋(Ruitaibio公司)，Ni-NTA亲和层析柱(GenScript公司)，4×蛋白上样缓冲液(Solarbio公司)，鼠抗His抗体(Boster公司)，羊抗鼠IgG抗体(abcam公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 GILE结构预测

    据课题组前期研究成果及相关文献[1-4]，选取多房棘球绦虫优势抗原表位。将各优势抗原表位相串联，构建多表位疫苗GILE。通过SWISS-MODEL(https：//swissmodel.expasy.org/)、pyMOL(https：//pymol.org/2/)软件对不同的多表位疫苗(优势抗原表位连接顺序不同)进行同源建模，选取其中最适合诱导免疫应答的优势抗原表位连接顺序，以选取的连接顺序为模板构建多房棘球蚴多表位疫苗GILE。通过SOPMA(https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)软件对设计的多表位疫苗GILE进行二级结构预测，初步评估多表位疫苗的免疫原性。通过VMD软件分析多表位疫苗GILE的亲水性，为后续GILE的表达、纯化提供依据。

    1.2.2 GILE基因序列合成和重组质粒pCzn1-GILE构建

    选择在结构预测中未产生其他抗原表位且各表位间无相互影响的模型为模板构建GILE ......