邓子豪，黄雅玲，刘利霞，陈雪梅

    (南方医科大学公共卫生学院职业卫生与职业医学系，广州 510515)

    低氧可导致脂质代谢异常，使组织中脂质蓄积，并影响身体机能[1-4]。肝脏内氧分压明显低于标准大气压且呈梯度代谢现象，肝脏对此反应敏感[5，6]。研究表明高原人群脂肪肝发病率和患病率远高于非暴露区普通人群[7，8]，提示低氧在脂肪肝发生、发展中起着重要作用。

    低氧应激可损伤线粒体功能，使ROS大量生成，引起蛋白质的错误折叠甚至失活[9]。而分子伴侣热休克蛋白90(HSP90)是蛋白质质量控制系统的重要一员，通过调控多种蛋白质的活化，在细胞信号转导、增殖和存活中发挥重要作用[10-12]。本研究通过干扰或敲除HSP90，探讨低氧环境下HSP90对人肝细胞脂质代谢通路的影响。

    1 材料与方法

    本研究经南方医科大学公共卫生学院伦理审查委员会审查批准。

    1.1 材料

    人肝细胞株L02、HepG2、Huh7购自中国科学院上海典型培养物保藏中心。用于HSP90α敲除的CRISPR-Cas9质粒购自iGeneBio公司(广州)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养

    用含有10%胎牛血清(Gibco)的DMEM基础培养基(Thermo Scientific Forma)培养细胞。低氧组是将细胞置于低氧孵箱(94%N2，5%CO2)中，常氧组是将细胞置于常氧孵箱(21%O2，5%CO2)中培养。低氧组细胞培养液需事先于低氧培养箱内平衡30 min，处理时迅速置换培养液。

    1.2.2 胞内HSP90敲低

    运用siRNA技术敲低胞内HSP90。HSP90的干扰序列由上海吉玛制药技术有限公司合成(siHSP90α：5′-CCCAGUUGAUGUCAUUGAUTT-3′；siHSP90β：5′-GCGGUAAGGAUAAGAAGAATT-3′ )。

    使用Lipofectamine 3000(Invitrogen)试剂进行转染。

    1.2.3 胞内脂质蓄积检测

    1.2.3.1 用PBS洗涤共聚焦培养皿中的细胞 ......