藏药德孜阳新醇提物对胃癌AGS细胞增殖与细胞周期的影响及作用机制探讨※
激酶,通路,1材料与方法,2实验方法,3统计学方法,2结果,1AGS细胞数量变化,2AGS细胞活性变化,3AGS细胞实时增殖曲线变化,4AGS细胞增殖水平变化,5AGS细胞周期变化及周期蛋
江亚惠,杨生玺,拉青才让,2,易 云,米云晟,赵延礼*(1.青海大学,青海 西宁 810001;2.青海省海南藏族自治州藏医院,青海 海南 813000;3.长治医学院,山西 长治 046099)
藏药德孜阳新(DZYX)用于抗肿瘤效果明显,但作用机制不明。本研究通过探讨DZYX醇提物对人胃癌AGS细胞增殖与细胞周期的影响,初步明确可能的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验细胞
胃癌细胞系AGS购自武汉普诺赛公司。AGS细胞培养于含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中(37℃,5% CO2),根据细胞生长情况,每2~3 d传代1次,取对数生长期细胞用于实验。
1.1.2 主要药物与试剂
藏药DZYX为青海省海南州藏医院产品;高糖DMEM培养基、胎牛血清为美国Corning公司产品;CCK-8试剂盒为上海翊圣生物科技有限公司产品(批号C6102030);细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒为北京四正柏生物科技有限公司产品(批号20210705);EdU细胞增殖检测试剂盒为广州锐博生物科技有限公司产品;β-actin、Cyclin A、CDK2、p-mTOR、AKT、P-AKT为美国Cell Signaling Technology 公司产品。
1.1.3 主要仪器
Spectra Max Paradigm型多功能酶标仪为美国Molecular Devices公司产品;NovoCyte型流式细胞仪为美国艾森公司产品;xCELLigence RTCA DP型实时无标记细胞功能分析仪为美国Agilent公司产品;PowerPac Universal型电泳仪、Mini PROTEAN Tetra Cell型电泳槽为美国 Bio-Rad公司产品;EYELA旋转蒸发仪为上海爱朗仪器有限公司产品;Ti2-E型荧光显微镜为日本Nikon公司产品。
1.2 实验方法
1.2.1 DZYX醇提物的提取与配制
研磨DZYX丸剂,称取60 g DZYX粉末浸泡于95%乙醇中过夜,回流提取1 h,后浓缩,残余物经真空冷冻干燥得19.44 g粗提物。用DMSO溶解藏药DZYX醇粗提物并经0.22 μm滤膜过滤后配制成600 mg/mL的母液 ......
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