中药材农药残留提方法对比分析
【摘要】目的：对比分析中药材中农药残留采取不同提取方法的有效性。方法：采取索氏提取、加速溶剂萃取以及超声提取等方式提取中药材中农药残留，经过凝胶渗透色谱、浓硫酸磺化以及弗罗里硅土柱净化方式，得出相应的样品，然后对比农药残留含量。结果：凝胶渗透色谱相较于固相萃取、磺化法准确率较高。结论：ASE的提取率相对较高，检测的结果也较为准确，并且操作自动，可以省时省力。
【关键词】中药材；农药残留；超声提取法
[中图分类号]R473 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2018)02-210-02
中药多采用口服的方式，通过改善人体的内环境提高人体抵抗疾病的能力，顺其自然的治好疾病。相对于西药来说，中药的毒副作用更小一些，但中药材在种植过程中，农药使用导致一定的残留，对使用者造成一定危害。有研究[1]认为，中药材农药残留检测方法比较多，很多检测方式都是采取添加回收率的方式，对农药提取是否安全进行衡量。然而，添加农药与药材自身吸收农药的状态存在巨大差异，但添加的农药和药材本身吸收的农药状态差异很大，通过添加回收方式无法对药物自身对农药吸收的情况进行准确反映。本次研究采用索氏提取、加速溶剂萃取以及超声提取等方式提取中药材中农药残留，探究了中药材中农药残留采取不同提取方法的有效性，总结如下：
1.仪器、试药与方法
1.1 仪器、试药
仪器包含SHB-B型循环水式多用真空泵、GC-2气相色谱仪——电子捕获检测器(GC-ECD)、HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)、DB1701石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)：DionexASE-350加速溶剂萃取仪、KH-3000plus凝胶渗透色谱仪、净化柱、填料50gBio-BeadsTypeS-X3200-400；KX(GJ)100-1密封制样粉碎机、CP214电子天平、SK5200LHC超声波清洗器、RE-52AA旋转蒸发仪等。
玄参、白术、黄芪；Florisil硅土柱、正己烷、无水硫酸钠、浓硫酸、乙酸乙酷、丙酮、石油醚、乙睛。农药的标准品：六六六(BHC)3个异构体α-BHC、β-BHC、γ-BHC、六氯苯、五氯硝基苯、pp’-DDE、反式氯菊酯(trans-permethrin，批号80104，纯度都高于99.0%。
1.2 方法
1.2.1 提取方法
将样品在自然条件下阴干后粉碎，过0.24mm孔径的样品筛，待用。
加速溶剂萃取：准确称取样品1g、硅藻土1g(硅藻土起到分散剂的作用)，混匀，置于10mL的萃取池中，待测。ASE系统壓力1500psi，温度100℃，加热时间5min，静态萃取时间5min，冲洗体积为60%，氮吹60s，循环2次。提取液在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干，待净化。
超声提取：准确称取1g样品与1g无水硫酸钠，混匀，置于100mL具塞三角瓶中，加入提取溶剂30mL，冰浴提取15min，将提取液过滤至100mL茄形瓶中，重复提取1次，合并提取液并在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干，待净化。
索氏提取：准确称取样品10g与无水硫酸钠1.0g，混匀，置于滤纸包中，放入索氏提取器中，加80mL提取溶剂(索氏提取器中30mL，100mL圆底烧瓶中50mL)，65℃水浴提取30min，约回流6次，将提取液转移至100mL茄形瓶中，在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干，待净化。
1.2.2 净化方法
磺化法指的是把浓缩后的残渣用正己烷定量转移至具塞刻度试管中，定容至5mL，再用移液枪加入1mL浓硫酸，涡旋1min，3000r/min离心10min，取上清液，进气相色谱仪测定。
固相萃取法操作如下：将浓缩后的残渣加1mL的正己烷进行溶解，将装有1mL左右高度无水硫酸钠的弗罗里硅土柱置于固定架上，先用10mL正己烷-乙酸乙醋(85：15)进行淋洗，当淋洗液近干时快速移入样品浓缩液，用2mL淋洗液脱茄，转入柱中，用50mL茄形瓶收集洗脱液20mL，在40℃水浴旋转浓缩至近干。
凝胶渗透色谱是把浓缩后残渣用乙酸乙醋-环己烷(1：1，V/V)定容至5mL，0.22μm滤膜过滤后，进行凝胶渗透色谱净化，乙酸乙醋-环己烷(1：1，V/V)为流动相，流速5mL/min，玄参样品收集11-14min流出物，白术收集11-16min流出物，黄芪样品收集14-17min流出物，在40℃水浴中进行浓缩，加正己烷1mL溶解，待测。
1.2.3 色谱条件
HP-5弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)，进样口温度250℃，不分流进样。升温程序：初始温度120℃保持1min，以8℃/min速度升温至150℃保持2min，以4℃/min速度升温至270℃保持4min。检测器温度为300℃，流速为1mL/min，进样量为1μL。
2.结果
检测结果见表1。
3.讨论
现阶段，在对中药材中农药残留进行监测时，主要采取回收率判断检测结果好坏。然而，基于添加农药会附着在药材的表面，和药材自然生长时所吸取农药不一样，两者提取出农药量也就存在差异[2]。本次研究中指出ASE的提取率相对较高，检测的结果也较为准确，并且操作自动，可以省时省力。但是在实际检测过程中，需要按照自身情况来设计方案与方法。
参考文献：
[1]刘洪波.气质联用测定杭白术等3种中药中5种拟除虫菊醋类农药残留[J].浙江农林大学学报，2015，32(1)：110-115.
[2]何惠芳.气相色谱技术检测中药农药残留的应用体会[J].医药前沿，2014，23(18)：10-11., http://www.100md.com(陈家德 高兴国)
【关键词】中药材；农药残留；超声提取法
[中图分类号]R473 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2018)02-210-02
中药多采用口服的方式，通过改善人体的内环境提高人体抵抗疾病的能力，顺其自然的治好疾病。相对于西药来说，中药的毒副作用更小一些，但中药材在种植过程中，农药使用导致一定的残留，对使用者造成一定危害。有研究[1]认为，中药材农药残留检测方法比较多，很多检测方式都是采取添加回收率的方式，对农药提取是否安全进行衡量。然而，添加农药与药材自身吸收农药的状态存在巨大差异，但添加的农药和药材本身吸收的农药状态差异很大，通过添加回收方式无法对药物自身对农药吸收的情况进行准确反映。本次研究采用索氏提取、加速溶剂萃取以及超声提取等方式提取中药材中农药残留，探究了中药材中农药残留采取不同提取方法的有效性，总结如下：
1.仪器、试药与方法
1.1 仪器、试药
仪器包含SHB-B型循环水式多用真空泵、GC-2气相色谱仪——电子捕获检测器(GC-ECD)、HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)、DB1701石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)：DionexASE-350加速溶剂萃取仪、KH-3000plus凝胶渗透色谱仪、净化柱、填料50gBio-BeadsTypeS-X3200-400；KX(GJ)100-1密封制样粉碎机、CP214电子天平、SK5200LHC超声波清洗器、RE-52AA旋转蒸发仪等。
玄参、白术、黄芪；Florisil硅土柱、正己烷、无水硫酸钠、浓硫酸、乙酸乙酷、丙酮、石油醚、乙睛。农药的标准品：六六六(BHC)3个异构体α-BHC、β-BHC、γ-BHC、六氯苯、五氯硝基苯、pp’-DDE、反式氯菊酯(trans-permethrin，批号80104，纯度都高于99.0%。
1.2 方法
1.2.1 提取方法
将样品在自然条件下阴干后粉碎，过0.24mm孔径的样品筛，待用。
加速溶剂萃取：准确称取样品1g、硅藻土1g(硅藻土起到分散剂的作用)，混匀，置于10mL的萃取池中，待测。ASE系统壓力1500psi，温度100℃，加热时间5min，静态萃取时间5min，冲洗体积为60%，氮吹60s，循环2次。提取液在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干，待净化。
超声提取：准确称取1g样品与1g无水硫酸钠，混匀，置于100mL具塞三角瓶中，加入提取溶剂30mL，冰浴提取15min，将提取液过滤至100mL茄形瓶中，重复提取1次，合并提取液并在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干，待净化。
索氏提取：准确称取样品10g与无水硫酸钠1.0g，混匀，置于滤纸包中，放入索氏提取器中，加80mL提取溶剂(索氏提取器中30mL，100mL圆底烧瓶中50mL)，65℃水浴提取30min，约回流6次，将提取液转移至100mL茄形瓶中，在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干，待净化。
1.2.2 净化方法
磺化法指的是把浓缩后的残渣用正己烷定量转移至具塞刻度试管中，定容至5mL，再用移液枪加入1mL浓硫酸，涡旋1min，3000r/min离心10min，取上清液，进气相色谱仪测定。
固相萃取法操作如下：将浓缩后的残渣加1mL的正己烷进行溶解，将装有1mL左右高度无水硫酸钠的弗罗里硅土柱置于固定架上，先用10mL正己烷-乙酸乙醋(85：15)进行淋洗，当淋洗液近干时快速移入样品浓缩液，用2mL淋洗液脱茄，转入柱中，用50mL茄形瓶收集洗脱液20mL，在40℃水浴旋转浓缩至近干。
凝胶渗透色谱是把浓缩后残渣用乙酸乙醋-环己烷(1：1，V/V)定容至5mL，0.22μm滤膜过滤后，进行凝胶渗透色谱净化，乙酸乙醋-环己烷(1：1，V/V)为流动相，流速5mL/min，玄参样品收集11-14min流出物，白术收集11-16min流出物，黄芪样品收集14-17min流出物，在40℃水浴中进行浓缩，加正己烷1mL溶解，待测。
1.2.3 色谱条件
HP-5弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm，0.25μm)，进样口温度250℃，不分流进样。升温程序：初始温度120℃保持1min，以8℃/min速度升温至150℃保持2min，以4℃/min速度升温至270℃保持4min。检测器温度为300℃，流速为1mL/min，进样量为1μL。
2.结果
检测结果见表1。
3.讨论
现阶段，在对中药材中农药残留进行监测时，主要采取回收率判断检测结果好坏。然而，基于添加农药会附着在药材的表面，和药材自然生长时所吸取农药不一样，两者提取出农药量也就存在差异[2]。本次研究中指出ASE的提取率相对较高，检测的结果也较为准确，并且操作自动，可以省时省力。但是在实际检测过程中，需要按照自身情况来设计方案与方法。
参考文献：
[1]刘洪波.气质联用测定杭白术等3种中药中5种拟除虫菊醋类农药残留[J].浙江农林大学学报，2015，32(1)：110-115.
[2]何惠芳.气相色谱技术检测中药农药残留的应用体会[J].医药前沿，2014，23(18)：10-11., http://www.100md.com(陈家德 高兴国)