(青岛大学附属医院肿瘤科,山东 青岛 266031)

    人表皮生长因子受体2(HER2)阳性的转移性/不可切除胃癌病人预后差，曲妥珠单抗联合化疗是目前标准治疗模式，但该联合方案的生存获益有限。免疫治疗被认为是肿瘤治疗中最具前景的治疗方法，然而其在胃癌中的应用仍不理想，且缺乏筛选有效人群的理想生物标记物。微卫星不稳定性(MSI)及程序性死亡配体1(PD-L1)的表达水平在多种肿瘤中显示出与免疫治疗效果密切相关，但目前关于胃癌病人HER2状态、MSI状态及PD-L1表达情况相关性研究报道较少。本研究旨在验证二代测序(NGS)与免疫组织化学(IHC)技术在胃癌HER2状态评估中的一致性，分析HER2阳性胃癌组织中MSI状态、PD-L1表达与临床病理特征的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    使用关键词“胃癌”、“大标本”、“HER2”在青岛大学附属医院病理资料数据库中搜索2013年1月—2017年12月行胃癌手术的病人，共搜索到病人1 390例。所有病人术后大标本均已进行HER2的IHC检测，其中105例病人的组织标本为HER2(3+)，即HER2阳性，选取92例术前未行放化疗的HER2阳性胃癌病人纳入本研究。入组的92例病人中，男性75例，女性17例；年龄35～87岁，中位年龄64岁；AJCC第8版分期Ⅰ期11例，Ⅱ期32例，Ⅲ期41例，Ⅳ期8例；Lauren分型肠型58例，弥漫型12例，混合型21例；腺癌82例，黏液腺癌5例，印戒细胞癌5例；高分化2例，中分化39例，低分化51例。

    1.2 NGS检测HER2基因有无扩增及MSI状态

    1.2.1组织DNA提取 石蜡组织切片行脱蜡、刮片、消化、升温、离心等处理，收集洗脱液于无菌离心管中，进行NGS检测。

    1.2.2文库构建 先将基因组DNA进行超声片段化处理，然后进行末端修复、3′端加A、添加接头以及PCR扩增，得到预文库。预文库在探针作用下进行16～24 h的杂交，抓取出检测所需的目的片段，最后给靶序列加上测序所需的分子标签，完成文库构建。

    1.2.3基因测序 使用IlluminaNextseq 500/550测序仪以快速模式进行大规模平行测序 ......