金兵男,江鑫铭,李霄霞,赵春华

    (青岛大学基础医学院遗传学与细胞生物学系,山东 青岛 266071)

    间充质干细胞(MSCs)是目前国内外研究最多的一类成体干细胞[1-4]，其来源广泛，在脂肪、骨髓、脐带、胎盘等多种成体组织中均广泛存在[5]。其中，人脂肪来源MSCs(hAMSCs)已成为再生医学领域中的理想种子细胞[6-10]。然而，在应用MSCs移植治疗骨质疏松等疾病的过程中常有炎症或细菌感染等情况发生，严重影响了MSCs移植的存活率和治疗效果。因此，寻找MSCs预处理方式，提高MSCs移植存活率，增强体内治疗效果，对MSCs的临床应用具有重要意义[11-13]。Toll样受体(TLRs)作为一类在固有免疫和适应性免疫中具有重要作用的模式识别受体，能够识别大量病原相关分子，介导机体免疫反应，维持机体的平衡状态，MSCs中也有部分表达TLRs[14]。已有研究显示，表达TLR3的MSCs在TLR3被Poly(I:C)活化后表现出抗炎作用，TLRs活化能够对MSCs的成骨分化产生影响[15]。使用Poly(I:C)活化MSCs的TLR3可以作为一种重要的MSCs预处理方法。本研究探讨TLR3活化对hAMSCs增殖及成骨分化的影响，为hAMSCs在骨质疏松等疾病治疗中应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞和试剂

    实验所用hAMSCs为吸脂术病人废弃的脂肪组织原代分离扩增获得； DMEM高糖、DME/F12培养基购于美国Hyclone公司；胎牛血清购于Excell公司；青霉素和链霉素购于新赛美公司；胶原酶P购于美国Roche公司；碱性磷酸酶试剂盒、CCK8试剂盒、反转录试剂盒、SYBR Green Master Mix购于上海翊圣公司；Poly(I:C)、油红O、茜素红购于美国Sigma公司；SDS-PAGE凝胶试剂盒、磷酸酶抑制剂购于上海雅酶公司；D-hank’s液、PBS、组织裂解液购于北京索莱宝公司；小鼠抗人FITC-CD14、FITC-CD34、FITC-CD45、PE-CD73、FITC-CD90、PE-CD105、FITC-HLA-DR购于美国BD公司 ......