王潇璐,于竹芹,汪贯习,刘宗保,周缜,郭云良

    (青岛大学,山东 青岛 266021 1 基础医学院中西医结合学系； 2 松山医院； 3 医学部外科实验中心)

    脑卒中是临床上常见的脑血管疾病，其中缺血性脑卒中约占80%[1]。东亚人群患脑卒中的风险位居全球首位[2-3]。脑缺血再灌注损伤是指脑组织缺血后血流再通进一步导致组织损伤和功能障碍的过程，是一种涉及多个因素的复杂病理生理现象[4]。氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)神经细胞模型，是通过氧糖剥夺后快速恢复氧糖供应，从而在细胞水平模拟临床脑缺血再灌注损伤，以进行细胞机制和药物研究[5]。正常情况下，自由基的生成和清除会形成动态平衡。在缺血再灌注时，会产生大量的自由基[6-7]。大量的活性氧(ROS)是导致缺血再灌注损伤的主要原因[8-9]。ROS是有氧代谢产生的自由基，是一种不稳定的化合物质，易与核酸、脂质和蛋白质反应，从而引起细胞损伤或细胞死亡[10]。ROS导致的氧化应激会进一步引起DNA损伤和局部炎症反应，引发炎症级联反应可能导致随后的炎症因子风暴，使细胞结构受损，最终导致细胞死亡[11-12]。因此，研究开发抗氧化应激的神经保护药物至关重要。传统中药胡黄连是玄参科植物西藏胡黄连的干燥根茎[13]。研究证明，胡黄连的主要有效成分是环烯醚萜类化合物，主要单体有效成分为胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ和胡黄连苷Ⅲ；胡黄连苷具有保护肝脏[14]，保护脑缺血再灌注[15-17]、肾缺血再灌注、急性胰腺炎[18]以及减轻炎症反应[19]的作用。但胡黄连苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用和最佳剂量尚未见报道。本研究通过建立人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞OGD/R模型模拟脑缺血再灌注损伤过程[20-21]，旨在探讨胡黄连苷对OGD/R损伤的保护作用及其最佳剂量，以期为缺血性脑血管病的治疗提供新的思路。

    1 材料与方法

    1.1 药品和试剂

    胡黄连苷Ⅰ(分子式为C24H28O11，分子量为492.47)、胡黄连苷Ⅱ(分子式为C23H28O13，分子量为512.46)、胡黄连苷Ⅲ(分子式为C25H30O13，分子量为538.5)(B20515，上海源叶生物科技有限公司)。DMEM高糖培养基(Hyclone， USA)；DMEM无糖培养基(GIBCO，USA)；胰蛋白酶(Trypsin ......