唐硕,徐华敏,谢俊霞

    (青岛大学基础医学院生理学与病理生理学系,山东青岛 266071)

    帕金森病(PD)作为一种常见的神经退行性疾病,主要以黑质(SN)多巴胺(DA)能神经元的缺失以及嗜酸性路易小体(LBs)的形成为特点[1]。尽管PD 的主要发病机制尚未完全阐明,但包括神经炎症在内的多种因素均可能参与了PD 的发病。导致神经退行性变的神经炎症活动主要由固有免疫细胞(如活化的小胶质细胞和星形胶质细胞)介导,这些细胞能够产生活性氧中间体、一氧化氮和炎性细胞因子等[2-5]。因此,阐明神经炎症机制和调控神经胶质细胞激活对于保护PD 病人SN 区DA 能神经元至关重要。SN 铁沉积是PD 病人和PD 动物模型的重要特征[6-7]。脂质运载蛋白-2(LCN2)是一种先天性免疫蛋白,在生理和炎症条件下作为重要的铁调节蛋白发挥作用[8]。脂多糖(LPS)能够与脂多糖结合蛋白(LBP)结合,由CD14分子介导LPS向细胞内传递,导致核因子κB(NF-κB)激活,诱导炎性细胞因子表达[9]。MG132是蛋白酶体抑制剂,同时还可以抑制蛋白酶体介导的NF-κB 活化[10-11]。研究发现,LCN2基因的启动子含有NF-κB及增强子结合蛋白(C/EBP)的结合位点,提示其表达可能受到NF-κB的调控[12]。然而,蛋白酶体、NF-κB 通路是否参与LPS诱导的LCN2表达尚不清楚。因此,本研究观察了铁负载试剂枸橼酸铁铵(FAC)和LPS以及MG132诱导的原代星形胶质细胞中磷酸化的核转录因子(P-NF-κB)和LCN2表达的变化。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    DMEM/F12培养液购自美国Hyclone公司,青霉素和链霉素双抗购于碧云天公司,多聚赖氨酸、LPS、FAC均购于美国Sigma公司,MG132购于美国Selleck公司,聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购于美国Millipore公司,BCA 蛋白浓度测定试剂盒、分离/浓缩胶缓冲液、RIPA 裂解液购于中国康为世纪公司,兔源β-actin抗体购于博奥森公司,LCN2抗体购于美国R&D 公司,P-NF-κB和NF-κB购于美国CST公司 ......