赵红丹,郭康,宋士军,高明

    (1 新乡医学院第三附属医院肿瘤内二科，河南 新乡 453000； 2 郑州大学第一附属医院肿瘤科)

    食管癌作为世界常见六大恶性肿瘤之一，具有显著的地域分布差异[1-2]。我国是食管癌高病死率国家，其中90%以上为鳞状细胞癌[3-4]。食管癌的发病与饮食习惯、生活环境、遗传因素、种族差异、地理分布等均有密切关系[5-7]。食管癌的发病过程涉及基因的遗传学改变，包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活[8-10]。SMAD4最早以胰腺癌的抑癌基因被发现，后续研究证实其表达缺失与人类多种恶性肿瘤的进程相关[11]。同时，微小RNAs(miRNA)作为一种非编码的内源性单链小分子RNA，已经被证实可以通过靶向调节mRNA的降解或抑制该类靶基因的翻译，进而激活或抑制下游信号通路，参与并介导肿瘤细胞的生长、增殖和凋亡等行为[12-13]。鉴于此，本研究通过探究miR-145-5p是否可以通过靶向调控SMAD4基因介导TGF-β/Smad4信号通路，进而参与食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡，并阐述其关联作用机制，以期为食管鳞状细胞癌的早期诊疗和预后评估提供新的分子标志物。

    1 资料和方法

    1.1 实验材料

    1.1.1组织标本 收集新乡医学院第三附属医院2016年3月—2019年3月经病理确诊的食管鳞状细胞癌病人68例，男40例，女28例，年龄34～78岁，平均(57.48±6.88)岁。所有病例均未接受放化疗；既往无除食管鳞状细胞癌之外的恶性肿瘤病史；既往无糖尿病、高血压及严重心脏病等病史；无家族遗传性病史。取食管鳞状细胞癌组织为实验组，同时取相应癌旁正常组织作为对照组。采集标本分为两份，一份液氮保存，一份甲醛固定备用。本研究通过医院伦理委员会评审批准，所有受试者均签署知情同意书。

    1.1.2主要试剂与仪器 食管鳞状细胞癌细胞株TE-1、TE-13、ECA-109和TTN(购买于中国科学院上海细胞库)，目的质粒均购自上海生工生物工程技术服务有限公司(上海，中国)，Lipofectamin 2000试剂盒、RNA提取试剂盒(Invitrogen公司，USA)，Prime Script RT试剂盒(宝日医生物科技公司，北京)，PCR试剂盒(北京天根生化科技有限公司)，GAPDH(abcam公司，英国)，ECL试剂盒(Bio-Rad，美国)，CCK8试剂、Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术公司，上海)；成像分析仪(Image Reader ......