邹通,孟瑾,宋淼,龚雪琳,邢士超,王笑峰

    (青岛大学基础医学院病原生物学系,山东 青岛 266071)

    近年来，高尿酸血症(HUA)的发病率逐渐上升，全球HUA的患病率为5%～25%[1]。除引起痛风外，HUA并发的多种代谢性疾病严重影响病人的生活质量，但引起HUA并发症的机制目前尚不清楚。研究表明，肠黏膜屏障功能失调、肠通透性增加是引起各种代谢性疾病的重要风险因素。我们之前的研究表明，HUA小鼠肠渗透性显著增加，肠渗透性增加可能是导致HUA并发多种代谢性疾病的因素[2]。但是，导致HUA小鼠肠渗透性增加的机制尚不清楚，而明确其机制对治疗HUA并发代谢性疾病具有重要意义。本研究通过转录组测序(RNA-seq)技术和生物信息学分析探究引起HUA小鼠肠通透性增加的相关基因，从而为HUA导致肠通透性增加的机制研究提供新的思路。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    HY组实验动物为由上海模型生物中心利用聚类规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关内切酶Cas9(Cas9)基因编辑技术敲除尿酸氧化酶基因(Uox-/-)建立的小鼠HUA模型，以同笼繁殖的野生型小鼠作为对照(WT组)，每组5只。所有小鼠均饲养在12 h光照-12 h黑暗昼夜节律循环的环境中，可以自由饮食和饮水。15周后安乐死处死小鼠，收集血清及肠组织，保存于-80 ℃。所有小鼠实验均符合青岛大学附属医院动物研究伦理委员会的要求。

    1.2 小鼠肠渗透性测定

    应用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的右旋糖酐(FD4，Sigma-Aldrich)测定小鼠的肠通透性。小鼠禁水4 h后，灌胃FD4，剂量为400 mg/kg。4 h后内眦取血，离心取血清，利用多功能酶标仪在激发波长为485 nm、发射波长为528 nm处检测FD4的荧光水平。

    1.3 肠组织RNA的提取

    加入Trizol，将空肠、回肠和结肠研磨成匀浆液，加入氯仿混匀，离心取上层液，加入异丙醇，离心，弃上清液，用体积分数为0.75的乙醇洗涤3次，沉淀即为总RNA。使用QuickDrop超微量紫外可见分光光度仪测RNA浓度及纯度。

    1.4 RNA-seq

    使用Agilent 2100 Bioanalyzer(Agilent RNA 6000 Nano Kit)检测组织总RNA的浓度 ......