固相萃取-高效液相色谱手性流动相添加剂法测定血浆中氧氟沙星对映体
小柱,1材料与方法,1仪器与试剂,2实验方法,3血浆样品预处理,2结果,1色谱行为,2工作曲线,3检测限,4回收率实验,5精密度实验,6生物样本血药浓度测定,3讨论
王乃毅,白小红(1.山西职工医学院,山西太原 030012;2.山西医科大学,山西 太原 030001)
氧氟沙星(ofloxacin,OFLX)是20世纪80年代合成的4-氟喹诺酮类药,它对革兰氏阴性杆菌有强大杀菌作用,口服吸收好,体内分布广,不良反应少,对多种感染有良好的疗效。而氧氟沙星是外消旋体,含左旋氧氟沙星(S-(-)-OFLX)与右旋氧氟沙星(R-(+)-OFLX)。其中,左旋氧氟沙星的抗菌活性是右旋氧氟沙星的8~126倍。因此血浆中氧氟沙星的拆分对临床安全用药有重要意义。色谱分离手性药物的方法有手性试剂衍生化(CDR)法,手性流动相添加剂(CMPA)法和手性固定相(CSP)法。由于其中的CMPA法[1]可采用普通的色谱柱,手性添加剂可以流出,也可更换,同时添加物的选择范围扩大。许多科研人员采用该法分离手性对映体[2~5]。刘学斌等[6]以甲醇-异亮氨酸手性溶液(取L-异亮氨酸1.04 g和硫酸铜1.0 g溶于1 000 mL水中)(17∶83,V∶V)为流动相,拆分优利沙星对映体,取得了较好的结果。本实验参考该条件对血浆中的氧氟沙星对映体进行了分离与测定。
生物样品的预处理是体内药物分析的关键,固相萃取技术萃取效率高,重现性好,杂质干扰极低,无乳化现象[7]。它可以从生物样品中提取净化微量药物,被广泛用于生物样品的检测中。本实验采用C18固相萃取小柱萃取血浆中的氧氟沙星,然后用高效液相色谱法 (high performanceliquid chromatogoraphy,HPLC)测定氧氟沙星对映体含量,结果更可靠,灵敏度更高。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
日本岛津高效液相色谱仪(Shimadzu,LC-10ATVPLiquid Chromatograph,CTO-10A Column Oven,RF-10AXLFluorescence Detector),20 μL定量进样环,AccuBOND C18固相萃取小柱(100 mg/mL,安捷伦公司),N-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所),800型离心沉淀器(上海手术器械厂),XW-80A型混旋器(上海医科大学仪器厂)。
氧氟沙星标准品(中国药品生物制品检定所),奥复星(0.2%氧氟沙星注射液,北京双鹤药业股份有限公司 0401072) ......
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