郭常敏，王达利，魏在荣，龙 艳

    (遵义医学院烧伤整形外科，贵州遵义 563099)

    软组织损伤、骨折、软骨缺损等是外科常见病多发病，损伤修复与重建、骨折、软骨的再生与治疗也是外科棘手问题，自体脂肪移植也是目前美容外科较好的方式之一。骨髓来源的间充质干细胞(BMSC)是较早发现并应用于临床的成体干细胞之一[1]，近年来通过对不同来源成体干细胞的研究和探索，有了进一步的发展，干细胞的应用逐渐广泛[2]，但仍然存在多方面的不足，如来源有限，获取困难等，不能很好的解决、应用于临床问题，而脂肪间充质干细胞来源方便，可以是肥胖病人抽脂所得，也可以是外科手术中剩余的脂肪标本，总之来源方便，获取量多，且自体移植，避免了免疫排斥反应。目前多数学者对其定向诱导分化的研究局限于前3代细胞，多次传代后是否能保持良好的生物学特性还需要进一步明确。本文通过分离培养 ADSCs，并对P9进行定向诱导分化，证明P9仍保持良好干性，在特定微环境下可以定向诱导分化。经过多次传代以后，可以提供充足的ADSCs，这就解决了干细胞来源相对不足的问题，只要少量的干细胞经过多次传代即可满足临床需求，为组织工程提供了很好的种子细胞来源。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源及制备 标本来源于遵义医学院整形外科手术病人剩余的脂肪组织，女性，28岁，无全身系统疾病，经患者知情同意，留取手术中剩余脂肪组织备用。

    1.2 主要的仪器和试剂 CO2培养箱(Thermo Forma，USA)，流 式 细 胞 仪 (FACSCalibur，BD，USA)，流式结果分析软件CellQuest(USA)，超纯水制备系统(MILLI-Q Biocel，MILLIPORE，USA)，倒置相差显微镜(Olympus，Japan)，高速低温离心机(Centrifuge 5804R，Eppendorf，Germany)，恒温水浴摇床 (SBD 50，Heto，Denmark)，- 80℃ 冰 箱(JOUAN Nordic，Denmark)，正压过滤器(Millipore，USA)，分散酶(Gibco，USA)，Ⅰ型胶原酶 (Gibco，USA)，0.125%胰蛋白酶(Gibco，USA)，L - DMEM培养液 (Gibco，USA)，胎牛血清 (FBS，Gibco，USA)，小鼠抗人角蛋白19单克隆即用型抗体(Anti- CK19 antibody，Gene Tech，中国)，小鼠抗人波形蛋白单克隆即用型抗体(Anti-vimentin antibody，Gene Tech ......