钱昱霏，刘建国，白国辉,2，管晓燕，韩 琪，白朋元

    (1.遵义医学院 口腔学院，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099)

    转基因番茄中外源目的蛋白提取液的筛选

    钱昱霏1，刘建国1，白国辉1,2，管晓燕1，韩 琪1，白朋元1

    (1.遵义医学院 口腔学院，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099)

    目的比较两种不同配方的蛋白提取液提取转基因番茄蛋白的效果。方法用A、B两种植物蛋白提取液提取相同防龋用转基因番茄蛋白，运用western blot、BCA法和间接ELISA法对提取出的转基因番茄外源目的蛋白进行检测。结果两种提取液提取的蛋白样品均在相对分子质量约为60 KDa处出现了低分子量蛋白条带，但植物蛋白提取液B所提取蛋白样品条带更清晰。蛋白提取液A、B分别提取的相同转基因番茄总蛋白为8.375 mg/mL和12.838 mg/mL,而其外源目的蛋白的含量分别是0.335 μg/mL和1.16 μg/mL，比值为2.25倍。经重复实验验证B液提取的目的蛋白在总蛋白含量的百分比较A液所提取的高，具有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料和主要试剂 含外源重组基因pacA-ctxB的转基因番茄果实(本课题组前期培育)；表面蛋白抗原PAc，抗PAc抗体(本课题组前期提取)；增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所)；800CW标记山羊抗兔二抗(基因有限公司)；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(碧云天生物技术研究所)。

    1.2 方法

    1.2.1 植物蛋白提取液配制[6-7]分别按以下配方配制植物蛋白提取液A、B， 4℃保存(见表1)。

    表1植物蛋白提取液配方

    A试剂剂量B试剂剂量1Mtirs-HCL(pH8)150mLNa2HPO43.581g甘油250mLKH2PO40.408gPVP4020.0gNaCl5.844g双蒸水定容至1000mL抗坏血酸钠4.953gPVP405.0g纤维二糖0.343g甲基吡喃糖苷0.194g植物蛋白酶抑制剂5.0g双蒸水定容至1000mL

    1.2.2 实验总流程 用本课题组前期培育的20株转基因番茄果实每株都用A、B两种提取液提取总蛋白后 ......