孙永苹，石 彬，朱红倩，汤贤英，马 锐， 姚新生

    (1.遵义医学院 免疫学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 第二临床学院，广东 珠海 519100；3.贵州省人民医院 血液内科，贵州 贵阳 550002)

    白血病(leukemia)是一种造血系统的恶性疾病，其特征是一系列白细胞及其幼稚细胞(即白血病细胞)在骨髓或其他造血组织中呈异常增生，使正常血细胞生成减少。其中，T细胞白血病，是T细胞在分化发育过程中出现异常，产生的肿瘤性增生。我国白血病的发病率较高，为3～4人/10万人，近年来由于环境污染等因素的影响，其发病率有上升趋势。T细胞的TCR CDR3 在T细胞白血病的发病机制、残余病变的诊断、个体化治疗等方面有一定的应用，TCR克隆性重排的检测在成熟T淋巴细胞白血病的诊断和治疗中有着较为广泛的应用。目前，已证实T细胞白血病和非T细胞白血病，外周血T细胞α链和β链TCR CDR3谱系均存在克隆性(或寡克隆性)增殖(或称为偏向取用)[1-3]。

    TCR CDR3谱系的早期分析技术有PCR-DNA印迹，PCR-单链构象多态性等，目前主要采用毛细管电泳激光扫描分析技术，首先PCR扩增CDR3区，然后根据引物的荧光标记，对PCR产物进行毛细管电泳激光扫描分析CDR3的长度和特征(CDR3 spectratyping)[4-5]，这种技术不适合对较大临床样本的分析，自2009年开始，我们建立了FQ-PCR溶解曲线技术分析TCR CDR3谱系[6-7]，并在临床肿瘤和感染等疾病中应用[8-11]。

    本研究在前期研究的基础上[3]，采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征，为T细胞白血病和非T细胞白血病的发病机制、机体免疫应答机制及个体化治疗等研究提供基础。

    1 材料与方法

    1.1 标本与试剂 经细胞形态学，组织化学等诊断为白血病患者15例(其中6例由遵义医学院附属医院血液内科提供，9例由贵州省人民医院提供)，患者临床资料(见表1)，4例健康志愿者(均为女性，年龄分别为32、26、28、28岁)外周血标本由本实验室健康人提供作为对照。

    mRNA提取试剂盒(TIANGENG公司), cDNA合成kit(MBI, Fermentas公司), Realtime PCR Master Mix(TOYOBO公司)等。

    表1白血病患者基本资料 ......