赵元茵, 顿国栋, 张 钊, 柳 鹏, 于 杰, Shiuan Chen, 李渝萍

    (1.第三军医大学 生物化学与分子生物学教研室，重庆 400038;2.Beckman Research Institute, City of Hope, National Medical Center, Duarte, CA 91010)

    凝溶胶蛋白(gelsolin，GSN)存在于多种类型的细胞和脊椎动物中，是一种重要的肌动蛋白结合蛋白[1]。多项研究已证实凝溶胶蛋白与炎症、肿瘤、淀粉样变性病等的病理过程有密切关系[2]。许多研究表明，在乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌和肺癌中，凝溶胶蛋白表达下调，是一种抑癌蛋白。Her2是人表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor, human EGFR)家族的成员，是由原癌基因Her2/neu，又称为c-ErbB2，编码的跨膜酪氨酸激酶受体，能通过其胞内部分的酪氨酸残基磷酸化而活化，进而激活下游一系列信号分子，促进细胞的增殖、迁移及侵袭。目前科学界普遍认同Her2是乳腺癌治疗中非常不利的独立因素[3]，其表达水平与乳腺癌的发生发展有着重要的联系。有报道指出在erbB-2(Her2/neu)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)过表达的乳腺癌亚型中，凝溶胶蛋白过表达与患者预后成负相关[4]。与此相似，在小细胞肺癌早期，有14%的病人凝溶胶蛋白高水平表达，表明凝溶胶蛋白是一种显著的负性预后因素[5]。

    为进一步理清GSN在erbB-2(Her2/neu)过表达乳腺癌中的作用及机制，我们以经典的ERα高表达乳腺癌细胞株MCF7构建的稳定过表达Her2/neu的MCF7/Her2为亲本细胞，构建同时稳定过表达GSN及Her2/neu的ERα阳性乳腺癌细胞系MCF7/Her2/GSN，从细胞水平对GSN在ERα阳性、Her2/neu过表达乳腺癌细胞中的作用进行了探索。

    1 材料与方法

    1.1 细胞、质粒载体、抗体及试剂(盒) MCF7细胞购自ATCC细胞库；MCF7/Her2是以ERα高表达的乳腺癌细胞株MCF7为亲本细胞建立的稳定过表达Her2的乳腺癌细胞系；载体pMG-H2质粒由Dr. Shiuan Chen实验室提供。转染试剂Lipotamine2000购自Invitrogen公司。质粒构建所用StuI，Nhe 1及连接酶购自New England Biolabs公司 ......