淋球菌OmpA蛋白的克隆表达、保守性及抗原表位分析

    黄健1，黄美容2，骆诗露3，肖质会3，聂鑫3，闵迅1

    (1.遵义医学院附属医院 医学检验科，贵州 遵义563099；2. 遵义医学院附属医院 输血科，贵州 遵义563099；3.遵义医学院 医学检验系，贵州 遵义563099)

    [摘要]目的 了解OmpA蛋白在不同型别淋球菌间的保守性，分析OmpA蛋白的B细胞抗原表位，并通过大肠杆菌表达系统获取其重组蛋白。方法 从Genebank数据库中获取不同型别淋球菌的OmpA蛋白氨基酸序列，利用ClustalX 2.1软件对序列保守性进行分析。利用DNASTAR软件预测分析OmpA蛋白B细胞抗原表位。构建ppSUMO-ompA重组表达载体，转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达OmpA重组蛋白，以SDS-PAGE检测表达的重组蛋白。结果 OmpA蛋白在不同型别淋球菌菌株间保守性高达99.6%，OmpA蛋白抗原表位可能位于28-37、78-86、95-102、147-154、159-165、201-208、213-218等氨基酸区段。SDS-PAGE检测大肠杆菌中表达出OmpA蛋白，主要以包涵体形式存在。结论 成功构建ppSUMO-ompA重组表达载体，获得包涵体形式的OmpA蛋白，且OmpA蛋白可能是一种保守性较好的淋球菌蛋白疫苗候选分子。

    [关键词]淋球菌；OmpA蛋白；原核表达；保守性；抗原表位

    淋球菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)是淋病的唯一病原体，其主要引起泌尿生殖系统化脓性感染[1]。资料显示，每年全球约有62 000 000新增淋病患者[2]。目前，淋球菌感染仍是严重威胁公共卫生安全的一种重要的性传播疾病。如何有效预防和控制淋病，成为全世界普遍关注的公共卫生问题。目前，抗生素是治疗其感染的主要手段，但随着淋球菌耐药菌株的广泛出现及播散[3]，对其防治带来严峻挑战。近年研究显示，保守的淋球菌疫苗能诱导杀菌性抗体的产生，从而能有效地清除淋球菌感染[4]。因此，积极发展有效的淋球菌疫苗将成为预防和控制淋病的重要手段。

    OmpA(outer membrane protein A)是淋球菌的一种外膜蛋白质，研究显示其在粘附和入侵宫颈癌细胞和子宫内膜细胞扮演了一个重要作用[5]。此外，在小鼠感染模型中，ompA基因敲除菌株与野生型菌株相比，其感染小鼠能力显著降低[5]。提示OmpA蛋白是淋球菌致病过程中的重要毒力因子，可能是一种较好的蛋白疫苗候选靶点。因此，本研究拟首先对其保守性进行分析 ......