董丽霞，罗军敏，刘春梅，孙永苹，马 锐，汤贤英，孙万邦，姚新生

    (1.遵义医学院免疫教研室，贵州遵义 563099;2.遵义医学院附属医院肾内科，贵州遵义 563099)

    基础医学研究

    FQ-PCR溶解曲线技术初步分析HFRS患者PBMC中T细胞TCRα链CDR3谱系特征*

    董丽霞1，罗军敏1，刘春梅2，孙永苹1，马 锐1，汤贤英1，孙万邦1，姚新生1

    (1.遵义医学院免疫教研室，贵州遵义 563099;2.遵义医学院附属医院肾内科，贵州遵义 563099)

    目的采用FQ-PCR溶解曲线技术初步分析肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)患者外周血T细胞TCRα链各可变区基因家族(TRAV)CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA，逆转录成cDNA，荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增34条TRAV基因家族CDR3受体库，采用溶解曲线技术分析CDR3谱系特征，并测序分析部分单克隆家族CDR3区基因和氨基酸序列的组成和特征。结果健康志愿者外周血T细胞TCRα链34个TRAV家族CDR3的溶解曲线谱型图呈现CDR3多克隆增生的高斯分布;15例HFRS患者多数TRAV家族CDR3的溶解曲线谱型图为多克隆增生的高斯分布，但出现数量不等的单克隆、寡克隆、极低水平表达的TRAV家族。部分测序结果显示TCRα链优势取用TRAV家族的CDR3区有着不同的基因序列和氨基酸组成。结论HFRS患者外周血中TCRα链各TRAV家族CDR3溶解曲线谱型图出现数量不等，形态不一的单峰、寡峰/偏峰、极低水平的现象，表现出不同的异常频率，TRAV优势取用家族的CDR3区有着不同的基因序列和氨基酸组成，实验结果可为进一步研究HFRS个体特异性T细胞应答提供基础。

    T细胞受体;互补决定区3;肾综合征出血热;荧光定量PCR;溶解曲线

    肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是由汉坦病毒(Hantaviruses，HV)感染引起的以鼠类为主要传染源的一种自然疫源性疾病，也称为流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever，EHF)。我国是世界上受HFRS危害最为严重的国家之一[1]。HFRS发病机制复杂，直至目前尚未完全阐明，个体特异性T细胞免疫应答在HFRS中发挥重要作用。

    人T细胞根据T细胞受体(T cell receptor ......