王灵军，王 鑫，贺莉芳，马元芬，生 燕，刘 晖

    (1.遵义医学院 基础医学院寄生虫学教研室，贵州 遵义 563099；2.眉山市彭山区人民医院 普外科，四川 眉山 620860；3.黔南民族医学高等专科学校 基础医学部病原生物学教研室，贵州 都匀 558000；4.遵义医学院 基础医学院形态学实验室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定

    王灵军1，王 鑫2，贺莉芳3，马元芬4，生 燕4，刘 晖1

    (1.遵义医学院 基础医学院寄生虫学教研室，贵州 遵义 563099；2.眉山市彭山区人民医院 普外科，四川 眉山 620860；3.黔南民族医学高等专科学校 基础医学部病原生物学教研室，贵州 都匀 558000；4.遵义医学院 基础医学院形态学实验室，贵州 遵义 563099)

    目的 在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上，为进一步提高抗菌肽的活性，利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBacTM-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114，对其活性进行探索研究。方法 构建pFastBacTMHTA质粒，将重组质粒转化Escherichiacoli(E.coli)DH10细胞，通过蓝白斑筛选，挑取阳性克隆。构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。构建Bacmid-pFastBacTM-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞，提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白，纯化，SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定。结果 重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞，细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象；培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测，在22 KD出现了1条特异性条带；通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达；通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性。结论 与E.coliBL21(DE3)原核表达系统相比，家蝇胚胎细胞系灵敏度较好，但仍有较大提升空间。

    抗菌肽；家蝇胚胎细胞；杆状病毒表达载体；真核表达

    抗菌肽是生物体产生的一类具有抗菌作用的小肽类物质，是机体天然免疫系统的重要组成部分，具有抗菌谱广、活性稳定、不易产生耐药性等优点。抗菌肽除了在真核生物的天然免疫系统中扮演重要的角色之外[1-2]，还在食品、饲料、农业、医药领域具有重要的应用价值[3]，甚至可以有效作用于对常规药物表现出抗药性的病原微生物，因此得到了广泛的关注[4] ......