郭 海，宋 爽，陈 伟，才秀莲

    (1.河南医学高等专科学校 组织学与胚胎学教研室，河南 郑州 451191；2.遵义医学院 组织学与胚胎学教研室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    XIAP和Smac在染锰大鼠生精细胞Caspase-9和Apaf-1表达中的作用

    郭 海1，宋 爽1，陈 伟2，才秀莲2

    (1.河南医学高等专科学校 组织学与胚胎学教研室，河南 郑州 451191；2.遵义医学院 组织学与胚胎学教研室，贵州 遵义 563099)

    目的 研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制，探讨锰导致的雄性不育机制。 方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组，腹腔注射MnCl24周和6周，免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果 ①各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 60只健康雄性SD大鼠，35日龄，体重110～130 g，由四川大学华西医院实验动物中心提供，许可证号：SYXK(川)2003-0001。设定对照组、低剂量(15 mg/kg)组和高剂量 (30 mg/kg)组，每组内再分为4周和6周组，共6组，每组10只。均为腹腔注射给药，对照组以生理盐水代替，每周5 d，每天1次，饲养及实验温度(20±1) ℃，湿度30%～50%，光照12 h/d。

    1.2 主要试剂及仪器 分析纯MnCl2·4H2O购于上海化学试剂公司；caspase-9和Apaf-1兔抗鼠单克隆抗体购于北京中杉金桥生物工程公司；XIAP和Smac小鼠抗大鼠单克隆抗体购于德国Roche公司；SABC免疫组织化学试剂盒购于北京中杉金桥生物工程公司；DMLB2HC型细胞图像分析系统购于德国LEICA公司。

    1.3 标本采集 分别于第4周末和第6周末处死各自时间段的对照组、低剂量组和高剂量组，分离双侧睾丸，纵切后4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，片厚4 μm进行冠状位切片，免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP及Smac表达。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知的caspase-9和Apaf-1表达阳性的乳腺癌切片及XIAP和Smac表达阳性的胃癌切片作为阳性对照，具体步骤按照说明书进行。

    1.4 观察指标及方法 Caspase-9、Apaf-1、XIAP及Smac阳性产物均呈棕黄色 ......