吴 迪，杨 滔，杜 清

    (遵义医学院 药学院药学实验教学示范中心，贵州 遵义 563099)

    动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发病机制复杂，大量实验研究表明，炎症反应及炎症因子的大量产生在AS的发生及发展中发挥重要作用，血管内皮细胞的炎症损伤启动AS的进程[1]。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是覆盖在革兰氏阴性菌细胞壁外膜黏肽上的一种脂质和多糖的复合物，可诱导失控性炎症反应。TOLL样受体(Toll-like receptors,TLRs)在慢性炎症反应中起重要作用，TLR4能特异性地识别配体LPS，当内皮细胞受到LPS刺激时，TLR4被激活，进而激活NF-κB信号通路，诱导炎症因子的大量表达，从而引起严重的炎症反应[2-4]。淫羊藿苷(icariin,ICA)来源于中药植物淫羊藿，属于黄酮醇苷类化合物。现有研究证实，淫羊藿苷具有一定的抗炎、抗凋亡、抗氧化等作用[5-7]，淫羊藿及淫羊藿苷在心血管保护方面具有较好的作用，且淫羊藿苷对AS的作用研究少有报道。本研究拟观察ICA对LPS诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达相关炎症因子如C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)的影响，探讨其抑制TLR4诱导的炎症反应，并初步研究可能的机制，从而为临床治疗AS等炎症疾病提供实验依据和可能的新的治疗途径。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验细胞 原代培养人脐静脉内皮细胞，脐带来源于健康足月剖宫产新生儿脐带，标本取自遵义市人民医院产科(征得产妇同意)。

    1.1.2 试剂 ECM 培养基(美国Sciencell公司)；胶原酶Ⅰ型、明胶、LPS(美国sigma公司)；肝素钠(北京鼎国公司)；胎牛血清(美国Gibco公司)；胰蛋白酶、青霉素、链霉素(美国Hyclone公司)；Ⅷ因子相关抗原兔抗人抗体、DAB 显色试剂盒、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(上海碧云天公司)；TLR4、NF-κB一抗(美国Abcam公司)；TAK-242(美国APExBIO公司)；CRP、IL-6酶联免疫吸附法检测试剂盒(武汉基因美生物科技有限公司)；淫羊藿苷(南京泽朗医药技术有限公司，经HPLC测定纯度≥98%)。

    1.1.3 仪器 电泳仪(美国Bio-Rad公司，Powerpac Universal) ......