令狐浪，李成龙，姚晓东

    (遵义医学院 药学院药学实验教学示范中心，贵州 遵义 563099)

    恶性黑色素瘤(malignant melanoma，MM)简称恶黑，是一种来源于黑色素细胞，且恶性程度极高的肿瘤，转移早，预后差，死亡率高，晚期和有远端转移的患者平均生存期仅有6～10个月[1-2]。黑色素瘤增殖能力较强，微环境血供丰富，易发生侵袭和转移，扩散迅速，转移部位多见于肺部和脑部[3-4]。白细胞介素-2、干扰素α-2b和达卡巴嗪等黑色素瘤辅助治疗药物毒副作用大，价格贵，并且临床治疗效果欠佳。因此，寻求有效的新型治疗药物变得至关重要。在近30年间，已上市的抗肿瘤药物中有62.9%来自天然产物或其衍生物[5]。中药作为我国特色资源宝库，种类繁多，在药物研发中具有独特优势。

    白芨是一种珍稀名贵中药材，为兰科植物白芨(Bletillastriata)的干燥块茎，具有收敛止血和消肿生肌的功效[6]，其野生品资源越来越少，主要产于贵州、四川和湖南等地，已被国家列为濒危珍稀保护植物名录[7]。据《本草纲目》记载：白芨别名连及草、白给等，其根白色，连及而生，故曰白芨[8]。“芨”和“及”通用。现代药理研究表明，白芨具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌和促进伤口愈合等作用。近年来，白芨在抗肿瘤方面时有报道[9-11]，但对黑色素瘤的相关研究却鲜见报道。白芨的主要活性物质为大量含有的多糖类成分，本研究对白芨进行水提醇沉提取白芨粗多糖，同时保留有机小分子物质部分，使用小鼠黑色素瘤B16F10细胞对其进行体外抗肿瘤活性研究，以期能为白芨的后续研究和临床应用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 药材 白芨购买于遵义市百姓人大药房，经遵义医学院药学院生药学教研室吴发明博士鉴定为兰科植物白芨属白芨的干燥块茎。

    1.2 细胞 小鼠黑色素瘤B16F10细胞由四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室馈赠。

    1.3 主要试剂 胎牛血清、DMEM/F12细胞培养基、胰蛋白酶和青霉素/链霉素溶液购买于美国Gibco公司；二甲基亚砜购买于美国Sigma公司；PBS缓冲液粉末购买于北京鼎国生物科技有限公司；CCK8试剂购于江苏碧云天生物科技有限公司；ELISA试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司；无水乙醇、氯仿和正丁醇等均为国产分析纯试剂 ......