龚 化，周治军，卢 童，徐 康，鲁 文

    (1.湖北省天门市第一人民医院 泌尿外科，湖北 天门 431700；2.湖北省天门市第一人民医院 神经内科，湖北 天门 431700)

    前列腺癌的发病率逐年升高，是男性泌尿、生殖系统最常见的恶性肿瘤之一[1]。转移是前列腺癌重要的生物学特性，多数患者确诊时已有远处转移，然而其转移的分子机制尚不清楚[2]。调节前列腺癌增殖、迁移相关基因的表达，抑制细胞的增殖和迁移，是前列腺癌靶向治疗研究的热点[3]。微小RNA(miRNA)是一类存在于真核生物体细胞中的内源性非编码RNA，可在转录水平抑制基因的表达，起着癌基因或抑癌基因的作用[4-5]。miR-148b-3p在多种肿瘤中呈低表达，发挥抑癌作用[6]。然而我们通过qPCR检测发现miR-148b-3p在多种前列腺癌细胞株中的表达均明显升高，miR-148b-3p在前列腺癌中的作用值得研究。本文通过将miR-148b-3p inhibitor转染至前列腺癌细胞PC-3，检测低表达miR-148b-3p对前列腺癌细胞PC-3增殖和迁移能力的影响，并探讨在基因及蛋白水平的作用机制，为前列腺癌的miRNA分子靶向治疗提供新的实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株和主要试剂 RPMI-1640培养液、KSFM培养液和胎牛血清购自美国HyClone公司；前列腺癌细胞株LNCap、22RV1、DU-145、PC-3和人正常前列腺上皮细胞RWPE-1购自上海拜力生物科技有限公司；荧光实时定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；miR-148b-3p 抑制物(inhibitor)、阴性对照miR-NC、miR-148b-3p模拟物、野生型PTEN 3’UTR-荧光素酶载体(PTEN-Wt)和突变型PTEN 3’UTR-荧光素酶报告载体(PTEN-Mut)及PCR引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成构建；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；CCK8试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；Transwell小室购自美国Corning公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；一抗PTEN、CDK6、Cyclin D2、Claudin-1、Vimentin、GAPDH和二抗均购于美国CST公司 ......