杜福宏，宋良鹏，郑徳伟

    (日照市中医医院 神经外科，山东 日照 276800)

    脑卒中是严重危害人类健康和生命安全的常见难治性疾病，祖国医学将其列为“风、痨、臌、膈”四大疑难病之首，具有高发病率、高致残率、高死亡率的特点[1]。其中，缺血性脑卒中约占卒中患者的75%左右，且易复发，给患者带来严重的经济压力和心理负担。目前，缺血性脑损伤发病机制研究主要集中在谷氨酸神经毒性、氧自由基损伤、炎性增加和神经元凋亡等[2]，而其中谷氨酸神经毒性和神经元凋亡均与神经元突触可塑性障碍有关。研究表明，海马内谷氨酸含量增加能导致突触后膜离子型谷氨酸受体NMDAR异常活化，使神经元轴突、树突复杂性下降而影响学习记忆功能[3]；神经元数量的缺失则会使突触传导功能减弱，影响大脑功能，进而导致神经精神疾病的发生[4]。补肾开窍祛痰方由《备急千金要方》中孔圣枕中丹加减而成，临床研究证实能明显改善脑卒中患者的运动能力及认知功能，具有良好的神经功能保护作用[5]，但其能否通过调节神经突触可塑性而缓解神经损伤尚未有实验研究。因此，本实验拟以缺血性脑损伤模型大鼠为研究对象，以海马突触可塑性为切入点，通过检测突触结构蛋白突触素-1(Synapsin-1)、突触后致密蛋白-95(PSD-95)和突触功能蛋白钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)、认知缺陷突触相关蛋白(SynGap)的表达情况，探讨补肾开窍祛痰方的神经保护作用及作用机制，为缺血性脑卒中的中医药防治提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 药物 补肾开窍祛痰方由熟地黄、鹿角胶、紫河车、菟丝子、益智仁、石菖蒲、升麻、全蝎等药物组成，原药材购于河南省中医院；依达拉奉注射液购自吉林博大制药公司，规格10 mL/15 mg，批号80-140712。

    1.2 实验动物 SPF级健康雄性SD大鼠，50只，体质量为180～220 g，由上海斯莱克动物有限公司提供，生产许可证号为SCXK(沪)2017-0005。实验期间大鼠均饲养在室温(24±2)℃、相对湿度(50±5)%、光/暗周期12 h/12 h的屏障环境中，自由摄食饮水。

    1.3 试剂与主要仪器 兔抗大鼠Synapsin-1、PSD-95、GAPDH单克隆抗体购自英国Abcam公司；兔抗鼠CaMKII、SynGap多克隆抗体购自美国CST公司；RIPA裂解液、BCA试剂盒购自美国Thermo公司；DAB试剂盒、苏木素购自北京中杉金桥；山羊抗兔二抗购自武汉博士德公司；Axio Imager光学显微镜购自德国ZEISS；SpectraMax超微量核酸蛋白测定仪购自英国BioDrop；MK3酶标仪、RM2235手动轮转式切片机购自美国Thermo；Gel Doc XR+凝胶成像分析系统购自美国Bio-Rad ......