魏谋达，张 宁，邢泽峰，尹晓伟，李志斌，段银钟

    (1.南京牙博士口腔医院，江苏 南京 210005；2.空军军医大学 口腔医学院，陕西 西安 710032)

    牙周膜成纤维细胞是常见的牙周膜细胞(Periodontal ligament,PDLC)，其死亡方式主要有3种：细胞自噬、细胞坏死以及细胞凋亡[1]。H2O2是口腔临床治疗药物，不仅具有治疗作用，还可诱发组织的氧化应激反应，导致牙周膜细胞凋亡。因此，研究H2O2诱导凋亡机制非常重要，这样才能有效地防止细胞非正常死亡。

    连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是凋亡抑制蛋白家族中最强的内源性抑制因子，可通过不同的信号转导通路及调控相关凋亡蛋白酶的表达产生抗凋亡作用[2]。XIAP 的抑制活性在于氨基端的BIRD(baculovirus IAP repeats domain,BIRD)功能域及其之间的连接区域，以及羧基端的环状锌指结构[3]。有研究表明，XIAP能直接结合并抑制caspase-3、7、9[4-5]。XIAP除抑制caspase 外，还受多种因子的调节。有研究表明，Akt在体外或体内都可以作用于XIAP；另外，XIAP的自我泛素化也被Akt 抑制。因此可认为XIAP 是Akt的下游靶标,是Akt效应通路主要介质[6]。c-Jun N-terminal kinase (JNK)，glycogen synthase kinase-3β(GSK3β)以及 protein kinase B (Akt) 3种激酶在细胞凋亡中均起重要作用。但前两者与XIAP的关系目前尚不清楚。

    因此，在本研究中我们探讨XIAP在H2O2诱导PDLC凋亡中的作用，研究XIAP与 Akt、JNK2以及GSK3β之间的关系，为牙周验证的预防和治疗及组织的修复重建提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 仪器 CO2恒温培养箱(Heal Force，德国)；Asinvert 200倒置相差显微镜(Nikon，日本)；超净化工作台(Thermo Forma，美国)；高速低温离心机(Backman，美国)；流式细胞仪(BD，美国)；酶标仪、恒压电泳仪、Western-blot 转印仪、微量蛋白转移印迹分析仪(Bio-Rad ......