刘国跃，王 勇，陈 淼

    (遵义医科大学附属医院 重症医学科二病区，贵州 遵义 563099)

    重症加强治疗病房(Intensive Care Unit，ICU)是各类危重患者救治的地方，尤其是呼吸衰竭后行机械通气的患者，而此类患者常常需要高浓度氧疗，以维持足够的氧供，但长时间高浓度氧疗可对患者肺脏有一定的损伤，即高氧性急性肺损伤(Hyperoxia induced acute lung injury，HALI)，这严重影响了患者预后并增加了患者的住院时间及住院费用[1-2]，但目前尚未找到更好的方法或药物来治疗或预防HALI，而寻找一种治疗或预防HALI的方法或药物成为当前的首要任务。本研究拟通过过表达大鼠肺内miRNA-21-5p，研究其对大鼠HALI形态学改变的影响，为HALI的基因治疗寻找理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级SD大鼠96只，雌雄不拘，体重200 g左右，由重庆陆军军医大学动物实验中心提供，动物生产许可证号：SCXK(渝)2012-0005。

    1.2 miR-21-5p最佳滴度确定 分别取1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106TU /mL 6种不同滴度慢病毒液200 μL ，通过鼻腔滴入大鼠肺内；滴入后0、24、48、72h处死大鼠并观察大鼠肺组织大体变化及荧光显微镜观察大鼠肺组织内荧光变化情况。

    1.3 实验动物分组及处理 按随机数字表法将96只大鼠分为正常组、HALI组和miR-21-5p组3组，每组32只。对照组直接饲养于空气中；HALI组饲养于高氧箱(氧浓度90%以上，温度保持在25～27 ℃，湿度保持在50%～70%，CO2浓度<0.5%)中制备HALI模型[3]；miR-21-5p组通过滴鼻法滴入200 μL带有miR-21-5p的慢病毒液，再饲养于高氧箱中。本实验中动物处置方法符合动物伦理学标准，并经遵义医科大学实验动物伦理委员会审批。

    1.4 检测指标及方法 每组大鼠分别在实验开始后0 、24、48、72 h随机抽取8只大鼠进行指标检测。

    1.4.1 miR-21-5p在肺组织内分布情况 通过滴鼻法滴入带有miR-21-5p的慢病毒液，使大鼠肺组织内miR-21-5p高表达，通过荧光显微镜观察HALI大鼠肺组织内荧光分布情况 ......