徐先林，文 雯，孙泽敏，欧刚卫

    (遵义医科大学 生物化学与分子生物学教研室，贵州 遵义 563099)

    抗生素的滥用或习惯性使用[1-2]导致耐药菌大量出现和各类抗生素耐药基因(Antibiotic resistance genes，ARGs)在不同生态系统中转移和传播[3]。人类肠道中多种微生物共存，细菌通过水平基因转移等[4]方式交换基因片段。已发现人类肠道微生物包含超过6 000种ARGs[5]，ARGs在肠道菌群间广泛转移可能破坏肠道菌群稳态，对人体健康造成威胁。

    虽然临床已经多年很少使用四环素(Tetracycline, TC)类抗生素治疗或预防感染性疾病[6]，但TC仍被大量用于防治多种动物疾病以及家禽和家畜饲养中[7]，未被充分利用或代谢的TC被大量排泄到环境中[8]。我国不同地区和许多国家的污水和地表水等环境中均检测到高浓度的TC残留[9-10]，残留的TC对生态系统中细菌产生选择压力，并通过移动基因元件(Mobile genetic elements，MGEs)[11-12]在细菌间转移。肠道微生物群长期暴露于亚剂量TC中，有利于潜在耐药菌生长[13]。

    肠道菌群具有高度抗生素耐药性[14]，目前对无抗生素使用史肠道耐药菌及相应ARGs特征的认识仍不清楚。本研究从儿童粪便中筛选TC耐药菌并评估细菌携带TC耐药基因情况，了解肠道内可培养TC耐药菌分布并分析耐药基因与耐药相关性，探讨儿童肠道菌群携带TC耐药基因的特点与规律。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 粪便标本采集 本研究招募了遵义市儿童4例(见表1)，均无TC使用史，征得监护人同意后采集新鲜粪便样本置于无菌EP管中，样品编号为Z-1、Z-2、Z-3、Z-4，低温条件运至实验室，保存于-80℃，并尽快进行后续实验。

    表1 受试者的基本情况

    1.1.2 主要药物与试剂 四环素药敏片(杭州微生物试剂有限公司)；四环素盐酸盐(50 mg/mL)(上海生工)；营养琼脂培养基、麦康凯培养基、脑心浸液培养基、布氏琼脂(青岛海博生物)；MH培养基(索莱宝生物)；DNA分子量标准(碧云天生物)；PCR Master Mix(2×)(Fermentas公司)；GoldView核酸染料(碧云天生物)；引物(上海生工)；其它试剂为国产分析纯 ......