陆安静，曾 瑶，杜艺玫，秦 琳，鲁艳柳，张倩茹，谭道鹏，何芋岐

    (1.遵义医科大学 国家级药学实验教学示范中心药学实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医科大学 基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099)

    据2015年版的《中国药典》规定，石斛类药材的法定来源依其形态性状及化学成分主要分为两大类：来源于金钗石斛DendrobiumnobileLindl.、鼓槌石斛D.chrysotoxumLindl.、流苏石斛D.fimbriatumHook.的栽培品及其同属植物近似种的新鲜或干燥茎统称为石斛，而铁皮石斛D.officinaleKimura et Migo的干燥茎被单列为铁皮石斛药材[1]。不同于与金钗石斛等石斛类药材的性状差异较大，以铁皮石斛D.officinale为主要来源的加工品“环草”有较多近似种来源，如细茎石斛D.moniliforme、罗河石斛D.lohohense、广东石斛D.wilsonii等“细茎类石斛”[2]，其中尤以细茎石斛、罗河石斛产量较大，市场上有以细茎石斛、罗河石斛冒充野生铁皮石斛的现象。“细茎类石斛”药材使用极为混乱，植物分类较为困难，甚至各种分类之间也存在较大冲突[3]。因此，传统的药材鉴定方法对于细茎类石斛药材的鉴别存在一定不足。随着现代分子生物学技术的发展，越来越多的DNA分子标记技术逐渐应用到石斛等多基源中药材的鉴定。如樊洪泓等[4]用SRAP技术对部分药用石斛的遗传多样性进行了研究；邱婧等[5]采用RAPD技术对9种药用石斛的遗传多样性及亲缘关系进行了分析；赵庭梅等[6]应用基因组SSR标记对铁皮、金钗、叠鞘三种石斛的遗传学多态性进行了研究；娄勇军等[7]采用ITS2序列对部分铁皮石斛伪品进行了鉴别。但很少有对石斛商品类别种间的研究报道，本文拟通过对铁皮、细茎、罗河三种“细茎类石斛”ITS序列进行比较分析，为混乱复杂的细茎类石斛药材分类鉴别提供科学参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 样品来源 实验样品来见表1。

    表1 样品来源信息

    1.1.2 主要试剂 新型快速植物基因组DNA提取试剂盒(GK4005 ......