高 翔,郑 磊,肖献花,李贵梅,刘永军,于 华,魏 聘

    (1.邯郸市第一医院 妇科,河北 邯郸 056000；2.邯郸市妇幼保健院，河北 邯郸 056000)

    卵巢癌是常见的女性癌症，其死亡率是女性癌症之首，发病率在女性癌症中位居第三[1]。因为早期卵巢癌临床症状不明显，缺乏可靠的诊断技术，导致早期卵巢癌患者常常被忽视，多数卵巢癌患者确诊时已经处于中晚期，早已错过最佳治疗时期[2-3]。随着医学领域不断发展，分子生物靶向治疗已成为当前卵巢癌研究的热点和重点。Yes相关蛋白(YAP1)在多种癌症内高表达，可以调控癌细胞内基因或信号途径进而参与癌症的发生和发展，与肿瘤分期、淋巴结转移、总生存率和不良预后有关[4-5]。毛静月等[6]研究结果显示，沉默YAP1能够抑制卵巢癌细胞的增殖和阻滞细胞周期，并诱导细胞的凋亡。mTOR/p70S6K信号通路在癌症的发展中具有重要的意义，能够参与多种癌症的生长、转移等[7-8]，有研究发现，EPR29可能抑制mTOR通路相关蛋白抑制卵巢癌细胞的增殖和转移[9]。关于YAP1和mTOR/p70S6K信号通路两者之间在卵巢癌的研究中尚不清楚，因此，本研究通过体外培养卵巢癌细胞SKOV3，探讨沉默YAP1是否能够通过调控mTOR/p70s6k信号通路影响卵巢癌细胞生长和转移，旨在为卵巢癌的诊断和治疗提供合理的数据支撑。

    1 材料与方法

    1.1 细胞和主要试剂 卵巢癌细胞SKOV3购自美国ATCC保藏中心；胎牛血清、DMEM培养基购自上海百研生物；青霉素、链霉素购自Gibco公司；Lipofectamine 3000试剂盒购自Invitrogen公司；si-NC、si-YAP1、引物购自赛默飞世尔；mTOR通路激活剂3-BDO购自Sigma公司；TRIizol试剂盒、逆转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司；CCK8试剂盒购自美国Millipore公司；YAP1抗体、Ki67抗体、E-cadherin抗体、N-cadherin抗体、p-mTOR抗体、p-p70s6k抗体、mTOR抗体、p70s6k抗体、GAPDH抗体购自英国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的二抗购自武汉博士德生物；Transwell和基质胶购自美国Corning公司 ......