宋 煜，李海涛，邵 敏，周鹤峰

    (1.遵义医科大学珠海校区 生物工程教研室，广东 珠海 519000；2.遵义医科大学珠海校区 生物化学教研室，广东 珠海 519000)

    二硫键即-S-S-(Disulfide bond,Dsb)，由多肽链上不同位点的两分子巯基(-SH)氧化形成，可分为链内和链间二硫键[1]。在生理条件下，蛋白质的二硫键经蛋白质二硫键异构酶催化作用断裂形成两个巯基，其功能发生变化[2]。在真核生物中，二硫键通常是在粗面内质网而非原生质形成[3]。二硫键能够被还原剂裂解是其最重要的一个特性。能够将二硫键裂解的还原剂较多，其中硫醇如β-硫基乙醇或二硫苏糖醇(Dithiothreitol，DTT)较为常用。在体内和人工条件下，蛋白质二硫键异构酶 (Protein disulfide isomerase，PDI)能够催化巯基与二硫键之间的转化，具有分子伴侣功能[4]。二硫键与巯基两种基团之间的相互转化主要由巯基-二硫键氧化还原酶作为反应的催化剂[5],是一类硫醇氧化还原酶，作为内质网中的一种驻留蛋白[6]，它催化新生多肽中二硫键的形成和异构化，这一过程对于正确的蛋白质折叠和维持细胞内蛋白质稳态至关重要[7-8]。蛋白质二硫键异构酶a3(PDIA3)，又被称作ERp57，分子量为58 KDa，具有PDI酶活性，可通过促进蛋白底物中二硫键的形成来调节新合成蛋白质的折叠[9]。

    近年来，PDI因其参与多种生理和病理过程而成为治疗多种疾病和癌症的新靶点[10-11]，例如，最近的研究表明PDI家族在调节血栓形成中起重要作用，促进血小板聚集和血栓形成[12]。鉴于PDI在血栓形成中扮演的重要角色，调节PDI活性可以作为治疗血栓的潜在药物靶点。抑制血小板的聚集和纤维蛋白的生成可通过抑制PDI活性来实现[13-14]。PDIA3是PDI家族的主要成员之一，与PDI具有高度同源性[15]。由于PDIA3可以调节多种刺激物诱导的血小板聚集和血栓形成，因而可研究PDIA3抑制剂来抑制血栓形成[16]。

    由于PDIA3具有断裂二硫键使其还原为巯基的能力，而牛胰岛素分子的A链与B链之间通过两对二硫键连结[17]，本实验采用牛胰岛素浑浊法测定PDIA3的活性。在还原剂DTT存在条件下，PDIA3将牛胰岛素A链和B链之间的二硫键还原为巯基。A、B链之间的二硫键还原并断裂后，A、B链发生错误折叠，B链形成沉淀物，通过测定吸光度即可知其还原活性。

    虚拟筛选(Virtual screening，VS)是以药物设计理论为基础，借助计算机技术和专业应用软件 ......