蒙祖迪,张焱皓,亓 凯,卫麟娜,高雪涵,罗军敏

    (遵义医科大学 免疫学教研室,贵州 遵义 563099)

    结核病是一种慢性呼吸道传染性疾病,由主要寄生在巨噬细胞中的结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起[1]。当MTB侵入机体后,巨噬细胞可对其进行识别、吞噬、杀伤。MTB通过刺激巨噬细胞产生大量的炎性细胞因子和趋化因子[2]募集适合自身寄居的免疫细胞,促使其逃避宿主的杀伤清除。然而,其也可通过抑制巨噬细胞凋亡、自噬体形成以及吞噬溶酶体融合等多种机制来逃避巨噬细胞的免疫清除[3]。热休克蛋白16.3(heat shock protein 16.3,Hsp 16.3)是在休眠期大量表达且存在于MTB膜上的小分子热休克蛋白质,通过干扰巨噬细胞自噬体形成[4]、凋亡[5]和促进巨噬细胞 M2 型极化[6]使MTB发生免疫逃逸。因MTB在躲避宿主免疫杀伤中的功能特性,猜想其可能在潜伏感染阶段对巨噬细胞趋化功能产生影响从而有利于自身寄居在巨噬细胞内。因此,本研究采用H37Ra野生型菌株(WT)、H37Ra热休克蛋白16.3回补菌株(COMP)、H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株(MUT)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞,初步探讨结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响,旨在为深入探索MTB Hsp16.3 在潜伏感染中对巨噬细胞功能的影响打下实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 结核分枝杆菌H37Ra(H37Rv弱毒株)热休克蛋白16.3敲除菌株由本实验室构建保存;6～10周龄雌性BALB/c小鼠购买于重庆市第三军医大学医学实验动物中心并饲养于本实验室SPF级动物房;小鼠重组GM-CSF购于NOVUS公司;RNAisoTMPlus、PrimeScriptTMRT Reagent Kit 和 SYBR Premix Ex Taq Real-time PCR Kit 购于TAKARA 公司;TNF-α和IL-6 ELISA 试剂盒购于英捷潍基公司;引物购于上海生物工程有限公司;APC标记的抗小鼠 CD11b 抗体和FITC 标记的抗小鼠 F4/80 抗体购于eBioscience公司;APC 标记的抗小鼠 CCR1 抗体、PE 标记的抗小鼠 CCR2 抗体和 APC 标记的抗小鼠 CCR5 抗体购于 R&D 公司;兔抗小鼠iNOS抗体和和兔抗小鼠 GAPDH 抗体购于abcam公司;HRP 标记的山羊抗兔二抗购于 CST 公司 ......