张阳春,杨桂莲,伍永旭,李 旭,雷俊芳,刘兆辉

    (遵义医科大学附属医院 耳鼻喉科,贵州 遵义 563000)

    头颈部肿瘤是全球第七大常见肿瘤,占所有肿瘤的3%,每年约有90万新病例和50万人死亡[1]。头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是头颈部肿瘤中最常见的病理类型,在所有头颈肿瘤中约占90%[2]。目前头颈部鳞状细胞癌预后差,且仍有部分头颈鳞癌在治疗后出现转移和复发[3]。因此,寻找对头颈部鳞状细胞癌早期诊断具有特异性的生物标志物,是目前头颈鳞癌研究中的重要任务。同源盒(homeobox,HOX)基因在器官和肿瘤发生中具有重要作用,HOX基因的异常表达扰乱了正常细胞内的信号稳态,从而引发细胞功能障碍和肿瘤免疫监控下降,进而发生细胞异常生长、细胞周期改变和细胞增殖信号通路激活等,为肿瘤生长创造了有利的微环境[4-5]。越来越多的证据显示,同源盒C6基因(homeobox C6,HOXC6)在癌症中高表达并可调控癌细胞的恶性进展,例如HOXC6可促进在胃癌、前列腺癌、宫颈癌的增殖,并在宫颈癌中发挥抑制凋亡的作用[6-8],但尚不知HOXC6基因在头颈鳞癌中的具体表达和临床意义。因此,本研究分析HOXC6在头颈鳞癌中的表达,探讨了它与患者临床预后的关系,并通过细胞实验检测其对头颈鳞癌细胞增殖与凋亡的影响,为头颈部鳞状细胞癌的诊断和治疗提供新的思路与方向。

    1 材料与方法

    1.1 组织标本收集 2021年10月至2022年11月就诊于遵义医科大学附属医院耳鼻喉科的头颈鳞癌患者30例,癌组织与癌旁组织配对收集。所有患者在手术切除肿瘤前均未接受化疗或放疗,且均签署知情同意书,获得遵义医科大学医学伦理委员会的批准(NO:KLLY-2021-164)后进行。所有标本离体后30 min内浸入RNA later溶液中,置于-80 ℃冰箱保存,用于后续RT-qPCR(reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验。

    1.2 细胞来源、主要试剂及仪器 头颈鳞癌细胞株FaDu购自美国ATCC细胞库;头颈鳞癌细胞株TU-212购自上海酶研生物科技有限公司;胎牛血清、DMEM高糖培养基、1640培养基、Opti-MEM培养基、PBS溶液以及0.25%胰蛋白酶购自美国Gibco公司;LipofectamineTM 3 000转染试剂盒购自美国Thermo Scientific公司;shRNA-HOXC6质粒(5′-TTGCCCAGAACCGGATCTACT-3′)、NC阴性质粒(5′-CAGGAAGAGGGCCTATTTCCC-3′)购自上海合生生物;RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒及实时荧光定量PCR试剂盒均购自日本Takara公司;RT-qPCRHOXC6及GAPDH引物购自北京擎科公司;CCK-8细胞增殖试剂盒购自北京索莱宝公司;Transwell小室(24孔,孔径8 μm)购自美国CORNING公司;一抗HOXC6购自英国Abcam公司;一抗GAPDH购自杭州华安公司;一抗Caspase3、Caspase9购自武汉博士德公司;二抗辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG购自杭州华安公司;细胞培养箱、酶标仪(型号:BB150-2TCS、MKK3)均购自美国Thermo Scientific公司;荧光定量PCR仪、凝胶成像仪(型号:CFX96、Gel Doc EZ)均购自美国BIO-RAD;倒置荧光显微镜(型号:IX71)购自日本olympus公司 ......