李腊梅，杨 晶，刘苑莹，史云欣，胡文超，解柔刚，姜 鸣

    (1延安大学生命科学学院多肽资源药物研究中心，陕西省区域生物资源保育与利用工程技术研究中心，陕西 延安 716099；空军军医大学基础医学院：2神经生物学教研室，4学员六大队，陕西 西安 710032；3西安国际医学中心心脏病医院，陕西 西安 710109)

    三叉神经节(trigeminal ganglion，TRG)位于颅中窝颞骨岩部尖端前侧的三叉神经压迹处，参与口面部区域的各种感觉功能，如非伤害性或伤害性机械、热和化学刺激[1-2]。病理条件下TRG神经元的超兴奋是三叉神经痛的重要原因[3]， TRG神经元中分子的表达变化以及生理特性变化被认为与三叉神经损伤或炎症相关的口面部感觉功能障碍有关[4]。感觉神经节的神经元按照基因表达可进行更为细致的分类[5]。不同形态的细胞类型往往表现出独特的电生理特性。根据TRG小神经元[6]、大鼠三叉神经中脑核神经元[7-8]、大鼠背根神经节(dorsal root ganglion，DRG)大细胞[9]的兴奋性特征进行分类，其主要类型为3类神经元(激活阈值较高)。然而，不同放电类型的神经元是否具有特殊的基因表达谱仍不清楚。因此，研究感觉神经元的放电模式与其基因表达关系，是研究神经功能的重要环节。

    单细胞转录组测序(single cell RNA sequencing，scRNA-seq)技术是在单个细胞水平上，对转录组进行扩增与测序分析的一项技术，对于检测低丰度转录本和发现新转录本具有其独特的优势[10]。通过定量分析单个细胞和不同细胞类型之间的分子和细胞变化将有助于寻找疼痛疗法的潜在靶点[11]。目前，新出现的一项结合全细胞膜片钳记录和单细胞RNA测序的“Patch-seq”技术[12-13]，具有在单细胞水平上将基因表达与神经功能联系起来的独特优势。本研究通过对小鼠TRG神经元的放电特征记录，并对特定放电模式的神经元细胞进行scRNA-seq，构建了小鼠TRG神经元的Patch-seq技术方法，进一步分析小鼠TRG神经元细胞放电模式及主要离子通道相关基因的表达分布，为进一步研究头面部初级感觉传入的分子机制奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 选用4～6周龄健康小鼠，雌雄不限，由空军军医大学实验动物中心提供，动物单笼饲养，昼夜节律为12 h光/12 h暗循环，室温为25 ℃左右，自由摄食饮水。所有操作和动物处理遵循空军军医大学实验动物福利与伦理委员会制定的指导原则(许可证号：20210456) ......