董瑞娜，王炳坤，吕雅洁，曹天宇，张衍国

    空军军医大学唐都医院皮肤科，陕西 西安 710038)

    血管内皮细胞(vascular endothelial cells，VECs)是血管管腔内侧的单层细胞，可以感受血液中的信号并及时做出反应。同时VECs在血管生成、血管内外物质交换和凝血等方面都扮演着重要角色[1]。不同解剖部位VECs在结构和功能上存在明显异质性[2]。例如，在结构上，大脑血管中连接紧密的内皮细胞有助于血脑屏障的形成，而不连续的内皮细胞排列则构成肝脏的窦状结构以促进物质交换[1]。在功能上，免疫方面，皮肤微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells，MVECs)高表达免疫相关分子人类白细胞抗原-Ⅱ(human leukocyte antigen-Ⅱ，HLA-Ⅱ)，可作为非专职型抗原呈递细胞启动免疫应答[3]；而肝窦VECs高表达清道夫受体，使其具有更强的内吞活性[4]，可吞噬血液中的脂质和可溶性抗原等[5]，促进炎症信号的传导。在代谢方面，真皮、肝脏和胃肠道VECs多倾向于氧化磷酸化途径，而糖异生途径在大脑和子宫VECs中更为活跃。通过RNA测序分析，证实了哺乳动物内皮细胞之间存在明显的器官差异性[6]。因此，要准确反映疾病特征，应针对性培养相应部位的VECs，就皮肤疾病而言，应获取皮损部位的原代MVECs进行培养。

    许多皮肤疾病的发生发展与血管关系密切，如银屑病、毛细血管瘤、硬皮病、瘢痕疙瘩等[7-10]。但目前，原代MVECs较难分离、纯化困难且易伴随其他细胞污染，对皮肤疾病发病机制的研究造成一定阻碍。因此，本文结合我们自身实践，对当前文献报道的真皮MVECs的分离、纯化与鉴定方法以及其优缺点等内容进行总结，旨在为读者选择合适的方法提供参考。

    1 真皮MVECs的分离

    1.1 组织块贴壁法

    使用组织块贴壁法培养人真皮MVECs的具体方法为：真表皮分离后，将修剪成合适大小的组织块贴附于预先用培养基湿润的培养皿中，于细胞孵箱静置数小时后加入培养液，待组织块周边有细胞游离爬出后将组织块去除[11]。

    该方法经济且易操作，但因真皮组织中成纤维细胞为优势细胞，易于生长，会对MVECs的生长产生抑制作用，易造成培养过程中大量成纤维细胞污染。我们在实验中发现，爬出的大部分细胞为成纤维细胞，MVECs很难爬出，考虑可能与其位于血管管腔内侧，难以贴壁有关。

    1.2 机械按压法

    将真表皮分离后使用器械的弯曲部分对真皮施加压力并向组织块外侧反复挤压 ......