斑花黄堇药材中总生物碱的提取、定性鉴定和含量测定(2)
3 药材中生物碱成分的含量测定和结果分析
3.1 最大吸收波長的测定和结果
准确称取盐酸小檗碱标准品10mg，加 95%乙醇定容于100mL 容量瓶中，制成浓度约为0.1 mg/mL盐酸小檗碱标准溶液，摇匀备用。取盐酸小檗碱标准溶液适量，在200-700nm 范围内扫描，确定生物碱类成分盐酸小檗碱的最大吸收波长，经过扫描由图1可见盐酸小檗碱的最大吸收波长在429nm。
3.2 盐酸小檗碱标准品溶液的标准曲线制作
分别量取盐酸小檗碱0.1mg/mL标准品溶液0，2，4，6， 8，10ml，于50ml容量瓶中，用95%乙醇定容至50ml后，超声摇匀，静置后，同时以试剂空白(0ml溶液)为对照，测定在波长429nm的吸光度A，以吸光度和浓度为纵横坐标绘制标准曲线，并计算标准方程和线性关系，测定数据见表3。
, 百拇医药
通过表3的数据可得到盐酸小檗碱标准品溶液的标准曲线见图2，计算可得其回归方程为： y = 13.4x + 0.0047， 相关系数 R=0.9998。 说明盐酸小檗碱标准溶液在8-40 ug/mL 范围内具有良好的线性关系。
3.3 样品溶液的含量测定
称取药材粉末2g，于250ml圆底烧瓶中，用95%乙醇超声提取三次后抽滤定容至 100ml 容量瓶，以试剂空白为对照，于波长429nm处测定吸光度 A， 查标准曲线， 即得所取样品溶液中盐酸小檗碱生物碱成分的相对浓度，测定六份斑花黄堇根粉中的总生物碱含量，如表4所示。
4 讨论
研究中参考已有文献应用0.5%的盐酸浸提斑花黄堇藏药材粉末中的生物碱成分，用2%氢氧化钠溶液沉淀酸水溶液中所提取出的生物碱成分，调节pH值和应用不同极性有机溶剂萃取碱水溶液，分别得到不同极性的生物碱成分，方法常规且实用。然后用六种生物碱沉淀试剂和化学试剂鉴别生物碱成分，通过观察反应的现象，可看出样品均不同程度的含有生物碱成分。采用制作盐酸小檗碱标准品溶液的标准曲线，测定6份斑花黄堇藏药材中生物碱成分的相对含量，其总生物碱的含量范围在0.49%～1.18%。今后可考虑使用更加精准的方法，比如HPLC，毛细管电泳，HPLC-MS等方法在本次研究的基础上深入探讨斑花黄堇中总生物碱和各种单体成分的含量情况，开发该品种的质量评价方法并有效利用。
, 百拇医药
参考文献
[1]中国科学院植物研究所.中国植物志[M].北京：科学出版社，1999，32：36- 40.
[2]拉巴，蒋思萍.西藏植物名录[M].拉萨：西藏人民出版社，2008，20.
[3]吕芳，徐筱杰.紫堇属藏药中生物碱成分及生物活性研究进展[J].时珍国医国药，2007，(18)：67-81.
[4]于雷，张连芳，东方，等.苦豆子中主要生物碱药理作用的研究进展[J].北京联合大学学报(自然科学版)，2015，20(2)：61-66.
[5]张颖，秦民坚，谢国勇. 刻叶紫堇的生物碱成分分析[J].植物资源与环境学报，2018，(19)：68-73.
[6]确生，王志波，李成思，等.响应面法优化斑花黄堇中总生物碱的提取工艺[J].中国现代应用药学，2017，34 (3)：358-362.
, http://www.100md.com
[7]潘国庆，张喜兵，沈国栋，等.大孔树脂法分离纯化塞北紫堇总生物碱的工艺研究[J].青海师范大学学报(自然科学版)，2016，(21)：84-88.
[8]陈建平，包保全，赵红梅，等.响应面优化蒙药漏芦花中总生物碱超声提取工艺研究[J].内蒙古医科大学药学院，2005，(7)：47-52.
[9]张德华，李茹，王永梅，等.生物碱的分类和鉴定方法研究进展[J].皖西学院，2006，(22)：48-54.
[10]迟森森，韩丹，刘斌.宽筋藤总生物碱含量测定方法研究[J].西北药学杂志，2015，7(30)： 84-92.
[11]确生，陈卫东，杨红澎，林鹏程，叶菊.青海斑花黄堇藏药资源调查[J].中药材，2017，40(11)., 百拇医药(吴江 杜清 林鹏程 候永强 才让卓玛 郭苏城 朋毛措)
3.1 最大吸收波長的测定和结果
准确称取盐酸小檗碱标准品10mg，加 95%乙醇定容于100mL 容量瓶中，制成浓度约为0.1 mg/mL盐酸小檗碱标准溶液，摇匀备用。取盐酸小檗碱标准溶液适量，在200-700nm 范围内扫描，确定生物碱类成分盐酸小檗碱的最大吸收波长，经过扫描由图1可见盐酸小檗碱的最大吸收波长在429nm。
3.2 盐酸小檗碱标准品溶液的标准曲线制作
分别量取盐酸小檗碱0.1mg/mL标准品溶液0，2，4，6， 8，10ml，于50ml容量瓶中，用95%乙醇定容至50ml后，超声摇匀，静置后，同时以试剂空白(0ml溶液)为对照，测定在波长429nm的吸光度A，以吸光度和浓度为纵横坐标绘制标准曲线，并计算标准方程和线性关系，测定数据见表3。
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通过表3的数据可得到盐酸小檗碱标准品溶液的标准曲线见图2，计算可得其回归方程为： y = 13.4x + 0.0047， 相关系数 R=0.9998。 说明盐酸小檗碱标准溶液在8-40 ug/mL 范围内具有良好的线性关系。
3.3 样品溶液的含量测定
称取药材粉末2g，于250ml圆底烧瓶中，用95%乙醇超声提取三次后抽滤定容至 100ml 容量瓶，以试剂空白为对照，于波长429nm处测定吸光度 A， 查标准曲线， 即得所取样品溶液中盐酸小檗碱生物碱成分的相对浓度，测定六份斑花黄堇根粉中的总生物碱含量，如表4所示。
4 讨论
研究中参考已有文献应用0.5%的盐酸浸提斑花黄堇藏药材粉末中的生物碱成分，用2%氢氧化钠溶液沉淀酸水溶液中所提取出的生物碱成分，调节pH值和应用不同极性有机溶剂萃取碱水溶液，分别得到不同极性的生物碱成分，方法常规且实用。然后用六种生物碱沉淀试剂和化学试剂鉴别生物碱成分，通过观察反应的现象，可看出样品均不同程度的含有生物碱成分。采用制作盐酸小檗碱标准品溶液的标准曲线，测定6份斑花黄堇藏药材中生物碱成分的相对含量，其总生物碱的含量范围在0.49%～1.18%。今后可考虑使用更加精准的方法，比如HPLC，毛细管电泳，HPLC-MS等方法在本次研究的基础上深入探讨斑花黄堇中总生物碱和各种单体成分的含量情况，开发该品种的质量评价方法并有效利用。
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参考文献
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