坎地沙坦对脑缺血再灌注大鼠SOD及MDA的影响
摘要：目的 观察坎地沙坦对脑缺血再灌注大鼠脑缺血体积及血清和脑组织SOD及MDA的影响，了解其抗氧化作用。方法 120只SD雄性大鼠，随机分为正常组、脑缺血再灌注模型组、坎地沙坦大、小剂量组；每组再随机分为再灌注24h和72h亚组，每组15只。给药干预2周后采用双侧颈总动脉夹闭法夹闭颈总动脉导致大鼠全脑急性缺血，缺血2小时后实现再灌注，制备脑缺血再灌注大鼠模型。各组另10只大鼠腹主动脉取血，低温离心分离血清，取脑组织制作10%组织匀浆，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清、脑组织匀浆中的SOD、MDA水平。结果 大鼠血清及脑组织SOD、MDA水平测定结果显示，与正常组比较，模型组血清及脑组织SOD水平明显减低，差异有统计学意义(P<0.05)；模型组血清及脑组织MDA水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，坎地沙坦各剂量24h组和72h组血清及脑组织SOD水平均明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)；坎地沙坦各剂量24h组及72h组血清及脑组织MDA水平均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 坎地沙坦可明显减少脑缺血大鼠脑梗死体积；降低血清及脑组织MDA水平，增高血清及脑组织SOD水平，提示坎地沙坦对脑缺血再灌注大鼠具有抗氧化损伤作用。
关键词：坎地沙坦；脑缺血再灌注损伤；SOD；MDA
【中图分类号】R338.2 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306(2019)01-021-02
脑血管疾病有高发病率，高致死致残率的特点，是神经内科最为常见的疾病之一。70%以上为缺血性脑卒中[ 1]，由于脑组织的供血动脉狭窄或闭塞、脑组织供血不足导致的疾病。目前治疗缺血性脑卒中主要以恢复改善脑组织供血为首要目的，但在恢复血流灌注后存在再灌注损伤[2]。脑缺血再灌注损伤机制复杂，活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)在脑缺血再灌注损伤的病程发展中发挥重要作用[3]。
本研究采用双侧颈总动脉夹闭法制备全脑缺血2h再灌注24h和72h，模拟脑缺血再灌注对大鼠的损伤，经给予坎地沙坦干预，观察再灌注24h和72h时对大鼠脑组织及血清中SOD、MDA等水平的影响。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
健康SD雄性大鼠120只，体重(250±10)g，SPF级，来自西南医科大学动物实验中心。随机分为正常组(假手术组)，脑缺血再灌注模型组、坎地沙坦小剂量组(0.2mg/kg)、坎地沙坦大剂量组(1mg/kg)；各组分别分为再灌注24h组和再灌注72h组两个亚组，每组15只。
1.2 药物及试剂
坎地沙坦酯片，广州白云山天心药业有限责任公司，生产批号：201705；氯代三苯基四氮唑(TTC)， Macklin 货号：T819365；大鼠(Rat)超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号：RA20008；大鼠(Rat)丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号：RA20007。
1.3 给药与造模
正常组和模型组给予生理盐水1ml/d灌胃，坎地沙坦小剂量组给予坎地沙坦0.2mg/(kg.d)灌胃，坎地沙坦大剂量组给予坎地沙坦1mg/(kg.d)灌胃，给药采用等容积灌胃，各组给药时间均为2周。对模型组及给药组大鼠均采用双侧颈总动脉夹闭法制备脑缺血再灌注模型。正常组(假手术组)操作与模型组相同，但无夹闭双侧颈总动脉操作。
1.4 指标检测
在实验设计时间结束时，各组另10只大鼠，用3﹪戊巴比妥钠(0.15ml·100g-1 )腹腔注射麻醉，用未加有抗凝剂的真空采血管腹主动脉取血，室温放置待血液凝固后，低温离心3000r/min离心15min，取上清液分装于EP管中，得血清标本，放于-80℃冰箱保存备用。各组大鼠取血后，立即断头取脑，迅速分离大鼠大脑组织，制备10%脑组织匀浆，低温3000r/min离心15min，取上清液分装于EP管中，得脑组织匀浆标本，放于-80℃冰箱保存备用。血清及脑组织匀浆中SOD、MDA采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，按南京建成生物研究所大鼠(Rat)超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒、大鼠(Rat)丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒说明书操作步骤进行测定。
1.5 统计学方法
所有数据采用SPSS17.0统计软件进行数据处理，结果以 表示，采用单因素方差分析，P<0.05则认为差异显著，有统计学意义。
2结果
2.1 对大鼠SOD水平的影响
与正常组比较，模型组大鼠血清及脑组织SOD水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，坎地沙坦小剂量72h组血清SOD水平有所增加，但差异无统计学意义(P>0.05)；坎地沙坦小剂量24h组、坎地沙坦大剂量24h组、坎地沙坦大剂量72h组大鼠血清SOD水平与模型组比较，差异有統计学意义(P<0.05)。坎地沙坦各剂量24h组和72h组大鼠脑组织SOD水平明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 对大鼠MDA水平的影响
与正常组比较，模型组大鼠血清及脑组织中MDA含量明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比，坎地沙坦大、小剂量24h组及72h组血清和脑组织中MDA含量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与坎地沙坦小剂量组比较，坎地沙坦大剂量组MDA含量有所降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。
3讨论
在脑缺血再灌注损伤发病机制的研究中，多数学者致力于自由基研究，逐渐证实自由基连锁反应参与脑缺血重要病理变化过程，缺血脑组织可激化自由基连锁反应使之加重脑缺血再灌注损伤[4]。生物体内自由基主要包括超氧自由基、一氧化氮自由基等，其中超氧自由基在生物体内分布最为广泛，参与自由基连锁反应的启动环节。本实验结果显示，模型组大鼠在发生脑缺血再灌注后，血清及脑组织中SOD水平较正常组均有不同程度的降低，模型组大鼠血清及脑组织MDA水平较正常组大鼠均明显升高，可见大鼠体内的氧化系统及氧化防御系统已被破坏失衡，氧自由基大量生成而清除减少，引发脂质过氧化反应而造成脑缺血再灌注损伤。
本实验中坎地沙坦明显减少脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积，降低血清及脑组织MDA水平；增高血清及脑组织SOD水平，提示坎地沙坦对脑缺血再灌注大鼠具有抗氧化脑保护作用。其机制可能与坎地沙坦拮抗血管紧张素，舒张血管等作用有关，增加了大脑的供血供氧，促进了氧的充分还原，减少了氧自由基的生成，由此减少了SOD的消耗。说明使用坎地沙坦能明显减轻脑缺血再灌注大鼠脑组织及血清中自由基损伤，提高其抗氧化能力，坎地沙坦小剂量组与大剂量组均出现相似效果。作为治疗高血压的一线药物坎地沙坦在有效控制血压水平的同时能很好改善脑并发症，具有实验和临床意义。
参考文献
[1] 陈怀珍.《急性缺血性脑血管病中西医诊疗指南》解读[J]. 中医药临床杂志，2013，3(11)：949-954 .
[2] 周迎春，邵念芳. 急性缺血性中风病因病机探讨[J]. 湖北中医药大学学报，1999，9 (2) ：19-20.
[3] A Lewén，P Matz，PH Chan.Free radical patways in CNS injury[J]. Journal of Neurotrauma，2000，17(10)：871-875.
[4] 陈勇，白小红，陈章. 脑缺血再灌注损伤自由基的改变及其与脑组织损伤的关系[J]. 西南军医，2009，11(3)：465-466., 百拇医药(李国春 宋岚 尹加珍 张红 黄新武)
关键词：坎地沙坦；脑缺血再灌注损伤；SOD；MDA
【中图分类号】R338.2 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306(2019)01-021-02
脑血管疾病有高发病率，高致死致残率的特点，是神经内科最为常见的疾病之一。70%以上为缺血性脑卒中[ 1]，由于脑组织的供血动脉狭窄或闭塞、脑组织供血不足导致的疾病。目前治疗缺血性脑卒中主要以恢复改善脑组织供血为首要目的，但在恢复血流灌注后存在再灌注损伤[2]。脑缺血再灌注损伤机制复杂，活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)在脑缺血再灌注损伤的病程发展中发挥重要作用[3]。
本研究采用双侧颈总动脉夹闭法制备全脑缺血2h再灌注24h和72h，模拟脑缺血再灌注对大鼠的损伤，经给予坎地沙坦干预，观察再灌注24h和72h时对大鼠脑组织及血清中SOD、MDA等水平的影响。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
健康SD雄性大鼠120只，体重(250±10)g，SPF级，来自西南医科大学动物实验中心。随机分为正常组(假手术组)，脑缺血再灌注模型组、坎地沙坦小剂量组(0.2mg/kg)、坎地沙坦大剂量组(1mg/kg)；各组分别分为再灌注24h组和再灌注72h组两个亚组，每组15只。
1.2 药物及试剂
坎地沙坦酯片，广州白云山天心药业有限责任公司，生产批号：201705；氯代三苯基四氮唑(TTC)， Macklin 货号：T819365；大鼠(Rat)超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号：RA20008；大鼠(Rat)丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号：RA20007。
1.3 给药与造模
正常组和模型组给予生理盐水1ml/d灌胃，坎地沙坦小剂量组给予坎地沙坦0.2mg/(kg.d)灌胃，坎地沙坦大剂量组给予坎地沙坦1mg/(kg.d)灌胃，给药采用等容积灌胃，各组给药时间均为2周。对模型组及给药组大鼠均采用双侧颈总动脉夹闭法制备脑缺血再灌注模型。正常组(假手术组)操作与模型组相同，但无夹闭双侧颈总动脉操作。
1.4 指标检测
在实验设计时间结束时，各组另10只大鼠，用3﹪戊巴比妥钠(0.15ml·100g-1 )腹腔注射麻醉，用未加有抗凝剂的真空采血管腹主动脉取血，室温放置待血液凝固后，低温离心3000r/min离心15min，取上清液分装于EP管中，得血清标本，放于-80℃冰箱保存备用。各组大鼠取血后，立即断头取脑，迅速分离大鼠大脑组织，制备10%脑组织匀浆，低温3000r/min离心15min，取上清液分装于EP管中，得脑组织匀浆标本，放于-80℃冰箱保存备用。血清及脑组织匀浆中SOD、MDA采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，按南京建成生物研究所大鼠(Rat)超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒、大鼠(Rat)丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒说明书操作步骤进行测定。
1.5 统计学方法
所有数据采用SPSS17.0统计软件进行数据处理，结果以 表示，采用单因素方差分析，P<0.05则认为差异显著，有统计学意义。
2结果
2.1 对大鼠SOD水平的影响
与正常组比较，模型组大鼠血清及脑组织SOD水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，坎地沙坦小剂量72h组血清SOD水平有所增加，但差异无统计学意义(P>0.05)；坎地沙坦小剂量24h组、坎地沙坦大剂量24h组、坎地沙坦大剂量72h组大鼠血清SOD水平与模型组比较，差异有統计学意义(P<0.05)。坎地沙坦各剂量24h组和72h组大鼠脑组织SOD水平明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 对大鼠MDA水平的影响
与正常组比较，模型组大鼠血清及脑组织中MDA含量明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比，坎地沙坦大、小剂量24h组及72h组血清和脑组织中MDA含量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。与坎地沙坦小剂量组比较，坎地沙坦大剂量组MDA含量有所降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。
3讨论
在脑缺血再灌注损伤发病机制的研究中，多数学者致力于自由基研究，逐渐证实自由基连锁反应参与脑缺血重要病理变化过程，缺血脑组织可激化自由基连锁反应使之加重脑缺血再灌注损伤[4]。生物体内自由基主要包括超氧自由基、一氧化氮自由基等，其中超氧自由基在生物体内分布最为广泛，参与自由基连锁反应的启动环节。本实验结果显示，模型组大鼠在发生脑缺血再灌注后，血清及脑组织中SOD水平较正常组均有不同程度的降低，模型组大鼠血清及脑组织MDA水平较正常组大鼠均明显升高，可见大鼠体内的氧化系统及氧化防御系统已被破坏失衡，氧自由基大量生成而清除减少，引发脂质过氧化反应而造成脑缺血再灌注损伤。
本实验中坎地沙坦明显减少脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积，降低血清及脑组织MDA水平；增高血清及脑组织SOD水平，提示坎地沙坦对脑缺血再灌注大鼠具有抗氧化脑保护作用。其机制可能与坎地沙坦拮抗血管紧张素，舒张血管等作用有关，增加了大脑的供血供氧，促进了氧的充分还原，减少了氧自由基的生成，由此减少了SOD的消耗。说明使用坎地沙坦能明显减轻脑缺血再灌注大鼠脑组织及血清中自由基损伤，提高其抗氧化能力，坎地沙坦小剂量组与大剂量组均出现相似效果。作为治疗高血压的一线药物坎地沙坦在有效控制血压水平的同时能很好改善脑并发症，具有实验和临床意义。
参考文献
[1] 陈怀珍.《急性缺血性脑血管病中西医诊疗指南》解读[J]. 中医药临床杂志，2013，3(11)：949-954 .
[2] 周迎春，邵念芳. 急性缺血性中风病因病机探讨[J]. 湖北中医药大学学报，1999，9 (2) ：19-20.
[3] A Lewén，P Matz，PH Chan.Free radical patways in CNS injury[J]. Journal of Neurotrauma，2000，17(10)：871-875.
[4] 陈勇，白小红，陈章. 脑缺血再灌注损伤自由基的改变及其与脑组织损伤的关系[J]. 西南军医，2009，11(3)：465-466., 百拇医药(李国春 宋岚 尹加珍 张红 黄新武)