郑发鲁 ，顾 林，张志才，邹梅娟

    (1. 沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016；2. 扬子江药业集团 南京海陵药业有限公司，江苏 南京 210049)

    甲钴胺是一种内源性的辅酶 B12，参与一碳单位循环，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的转甲基反应过程中起重要作用，具有营养神经，调节神经功能的功效[1]。因此，目前临床上广泛用于一些周围神经病变，如末梢神经炎、面神经炎、面瘫、三叉神经痛或者糖尿病周围神经病变等疾病的治疗[2-5]。原研为日本卫材研发生产的糖衣片，2003 年获得中国国家食品药品监督管理局批准正式上市。制剂中有关物质检测是其质量研究的重要方面，《日本药典》17 版中甲钴胺片质量标准中无有关物质检查项，《中国药典》2020 年版二部甲钴胺片质量标准中未对其降解杂质羟钴胺、氰钴胺进行控制。现参考国内外文献[6-7]，建立高效液相色谱(HPLC)法测定甲钴胺片中有关物质方法，以促进该制剂质量的提高。

    1 仪器与试药

    Agilent1260 高效液相色谱仪(美国安捷伦)；XSE205 电子分析天平(瑞士梅特勒)；水为超纯水；乙腈为 Tedia 色谱纯；己烷磺酸钠为 Fisher Chemical 色谱纯；其他试剂均为分析纯。对照品甲钴胺对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100692-201403，含量为 94.4%)；氰钴胺对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100248-201504，含量为 89.7%)；羟钴胺对照品(TRC，批号：11-XAL-96-1，含量为96.49%)；自制甲钴胺片(批号：16112701、16121402、16121403)；原研甲钴胺片(卫材(中国)，批号：5YA28P)。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    色谱条件如下：色谱柱：Agilent Poroshell EC-C18(4.6 × 250 mm, 4 μm)；以含己烷磺酸钠0.47% 的 0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用稀磷酸调节 pH 至 3.5)为流动相 A，乙腈为流动相B；按表1进行梯度洗脱，后运行时间设置为 10 min；柱温为 40 ℃；进样器温度为 4 ℃；流速为 1.0 mL·min-1，检测波长为 266 nm，进样量 40 μL。 ......