ＳＤ大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立(1)
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【中图分类号】 R331 514 【文献标识码】 A 【文章编号】1185-1672(2006)-08-0676-06
摘要 目的 探索SD大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型制作的试验方法与技术。方法 采用完全福氏佐剂-脑脊髓匀浆，并辅以注射百日咳疫苗诱导SD大鼠EAE模型，比较不同的免疫原(同种或异种)，注射方法(一次或多次注射)以及性别差异对模型制作的影响。观察和比较动物的神经症状和病理改变。结果 使用同种脑脊髓匀浆，多次注射雌性SD大鼠诱导的模型，其发病持续时间分别为16～20天，10～14天；发病率为85%；复发率为46 67%，而致死率仅有5 88%；明显优于其他组别。病理学证实发病大鼠具有典型的脱髓鞘改变和胶质结节形成。结论 使用同种脑脊髓匀浆，多次注射雌性SD大鼠诱导的动物模型其临床表现、病理特征、病程特点与人类的多发性硬化(MS)具有很大的相似性，适用于MS的研究。
关键词 实验性变态反应性脑脊髓炎；SD大鼠；动物模型
The establishment of experimental allergic encephalomyelitis model in SD rat
Zheng JianZheng,Gao Cong,Xie FuHua,et,al
The Second Afficiated Hospital of Guangzhou Medical College,Guangdong,510260,China
Abstract Objective To explore the experimental method and technique of making experimental allergic encephalomyelitis model in SD rat Methods The animal model was established in SD rat by injecting spinal cord homogenate in Freud's complete adjuvant and bordetella pertussis vaccine(BPV)We had used different methods such as homologous or heterologous homogenate, one or multiple injections, and different rats to establish animal modelIts clinical symptoms and histological alteration was observed and comparedResultsThe animal model by injecting homologous homogenate twice in female SD rat is better than other, whose duration of paralysis is 16～20 days，and incidence 85%, incidence of relapse 46 67%，and fatality rate 5 88%We could find many demyelinated lesions in the brain and spinal cord in animal like human with multiple sclerosis(MS)Conclusion The animal model of EAE induced by injecting homologous homogenate twice in female SD rat bears a resemblance to the features of MS, and might be a better model for the study of multiple sclerosis
Key Words Experimental allergic encephalomyelitis; SD rat; Animal model
实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)是实验敏感动物发生的,由同种型，同种异型，异种异型致脑炎抗原诱导产生的，由细胞免疫反应介导的，以中枢神经系统白质脱髓鞘性为特征的迟发型超敏反应性自身免疫疾病。EAE具有与人类多发性硬化(Multiple Sclerosis，MS)极为相似的临床，生化，免疫及病理特征，是研究MS理想的动物模型。文献报道的制备EAE模型的方法很多，其敏感品系多为啮齿类动物，如Lewis大鼠，SJL小鼠，PJ小鼠等。用大鼠制备EAE，具有很多优点，如大鼠在同一品系中个体间差异较小，繁殖快，饲养方便等，而且鼠EAE的临床症状和病理变化与多发性硬化较为相似。但国内由于缺乏相关的敏感品系，我们尝试用国内常见的非敏感品系SD大鼠建立EAE模型。
1 材料和方法
1 1 材料
1 1 1 实验动物 SD大鼠雌性90只，雄性20只,8～10周龄，体重200～230g (广东省实验动物中心提供)。
1 1 2 试剂及免疫原 自备SD大鼠脊髓脑匀浆(SD spinal cord homogenate, SD-SCH)，自备牛脊髓脑匀浆(bovine spinal cord homogenate，BSCH)，自备福氏完全佐剂(Freud's complete adjuvant) ；福氏不完全佐剂(北京鼎国公司)，卡介苗100mg/ml(上海生物制品所)，百日咳杆菌2 x 1010个菌体/ml (上海生物制品所)。
1 1 3 主要仪器 微量震荡器(马来西亚IKA公司);Olympus New vanox多功能显微镜(日本Olympus公司);G S-6R Centrifuge冷冻离心机(美国Beckman公司)
1 2 方法
1 2 1 SD大鼠脊髓脑匀浆(SD-SCH)制备 用过量的10%水合氯醛腹腔注射SD大鼠致死，取脊髓及大脑称重。按1g大鼠脊髓及大脑白质加1ml PBS的比例，在冰浴中用电动匀浆机(3000r/ min)，将其匀浆3min(每匀浆1min，间隔1min)，制成大鼠脊髓脑匀浆。将该匀浆与等体积的完全福氏佐剂(CFA)充分混匀制成诱导乳剂。
1 2 2 牛脊髓脑匀浆(BSCH)制备 方法同上。
1 2 3 福氏完全佐剂(Freud's complete adjuvant，CFA)制备 按1 5ml不完全福氏佐剂，0 5ml卡介苗(100mg/ml)的比例制备CFA。
1 2 3 EAE模型的制备 实验组按不同比例于每只大鼠双后足垫皮下注射含有不同免疫原的CFA，并于大鼠后足垫背面真皮内辅以注射0 2ml百日咳杆菌(2 x 1010个菌体/ml)，正常对照组用PBS与CFA等量混合后注射。各实验组别，免疫原，剂量及注射次数如表1。致敏当日计为第0天。致敏后常规饲养各实验组和对照组，每日称其体重。表1 实验组别、免疫原、剂量及注射次数
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