沙门氏菌检查的基本步骤
□张 冉
沙门氏菌是一种较为活跃的病菌,常常出现在蛋类、肉类或家禽中,是厌氧型病菌。虽然沙门氏菌在水中难以繁殖,但是也能够生存2周~3周,通常在20摄氏度以上即可大量繁殖,最合适的繁殖温度为37摄氏度。因此,如果食物中含有沙门氏菌,常温下可能会繁衍出大量沙门氏菌。当病菌进入体内时,轻微症状是肠胃不适,严重的话可能会引起致死性疾病。沙门氏菌对热抵抗力不强,在60摄氏度时只需15分钟即可被杀死。因此,食物最好低温储存,并在食用前加热,才能最大程度上避免由沙门氏菌感染导致的食物中毒或者肠胃疾病。
沙门氏菌的检测流程一般要通过以下5个步骤:
一、前增菌
这个步骤的过程主要是,首先取25克样品,放进盛有225毫升缓冲蛋白胨水的无菌均制袋中,用均质器拍打一两分钟,然后在36摄氏度±1摄氏度下进行培养,培养8小时~18小时。原来国际标准只要求加工食品进行前增菌,后来改成了所有样品都要进行前增菌。
二、增菌培养
增菌培养是用来检测食品中是否存在沙门氏菌的,一般标准是25克,即在25克食品中不能带有1个沙门氏菌。增菌培养可以选择两种选择性分离增菌液,一种用来抑制除沙门氏菌之外其他肠道菌的生长,另一种是在不影响其他肠道菌生长的情况下促进沙门氏菌的生长。将样品分别转种于两种培养基中,再将第一种培养基在42摄氏度±1摄氏度下培养18小时~24小时,另一种培养基则在36摄氏度±1摄氏度下培养18小时~24小时。
三、分离
通过鉴别培养基,将沙门氏菌分离出来。如果增菌液的灵敏度比较好,那么在每一种鉴别培养基上都会生长许多沙门氏菌的菌落。
四、生化试验
1.三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验:分别在选择性琼脂平板上挑取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再在底层穿刺;接种针不要灭菌,直接在试验培养基和营养琼脂平板上接种赖氨酸脱羧酶,在36摄氏度±1摄氏度下培养18小时~24小时,在必要的时候可延长至48小时。
2.系列生化反应试验:在试验培养基接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶的同时,可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(氢离子浓度指数7.2)、氰化钾培养基;也可在初步判断结果后,从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。在36摄氏度±1摄氏度的温度中培养18小时~24小时,必要时可延长至48小时。将已挑菌落的平板储存于2摄氏度~5摄氏度或室温至少保留24小时,以备必要时复查。
五、血清学鉴定
在载玻片靠近磨砂的一边滴生理盐水以做对照,在另一边滴一滴血清。在三糖铁琼脂培养基的斜面用灭菌后的接种环取一点菌种,放进血清中,然后用酒精灯将接种环灭菌冷却后,在生理盐水中放入少量菌种。观察菌落是否在血清中凝结,同时与生理盐水中的菌落进行对比。
沙门氏菌的检测要通过以上5个步骤,这种检测也可以运用于临床医学上,可用于针对沙门氏菌感染的检测中,以此可以检测是否含有沙门氏菌,从而判断疾病是否由沙门氏菌引起。
(作者供职于镇平县人民医院检验科), http://www.100md.com
沙门氏菌是一种较为活跃的病菌,常常出现在蛋类、肉类或家禽中,是厌氧型病菌。虽然沙门氏菌在水中难以繁殖,但是也能够生存2周~3周,通常在20摄氏度以上即可大量繁殖,最合适的繁殖温度为37摄氏度。因此,如果食物中含有沙门氏菌,常温下可能会繁衍出大量沙门氏菌。当病菌进入体内时,轻微症状是肠胃不适,严重的话可能会引起致死性疾病。沙门氏菌对热抵抗力不强,在60摄氏度时只需15分钟即可被杀死。因此,食物最好低温储存,并在食用前加热,才能最大程度上避免由沙门氏菌感染导致的食物中毒或者肠胃疾病。
沙门氏菌的检测流程一般要通过以下5个步骤:
一、前增菌
这个步骤的过程主要是,首先取25克样品,放进盛有225毫升缓冲蛋白胨水的无菌均制袋中,用均质器拍打一两分钟,然后在36摄氏度±1摄氏度下进行培养,培养8小时~18小时。原来国际标准只要求加工食品进行前增菌,后来改成了所有样品都要进行前增菌。
二、增菌培养
增菌培养是用来检测食品中是否存在沙门氏菌的,一般标准是25克,即在25克食品中不能带有1个沙门氏菌。增菌培养可以选择两种选择性分离增菌液,一种用来抑制除沙门氏菌之外其他肠道菌的生长,另一种是在不影响其他肠道菌生长的情况下促进沙门氏菌的生长。将样品分别转种于两种培养基中,再将第一种培养基在42摄氏度±1摄氏度下培养18小时~24小时,另一种培养基则在36摄氏度±1摄氏度下培养18小时~24小时。
三、分离
通过鉴别培养基,将沙门氏菌分离出来。如果增菌液的灵敏度比较好,那么在每一种鉴别培养基上都会生长许多沙门氏菌的菌落。
四、生化试验
1.三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验:分别在选择性琼脂平板上挑取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再在底层穿刺;接种针不要灭菌,直接在试验培养基和营养琼脂平板上接种赖氨酸脱羧酶,在36摄氏度±1摄氏度下培养18小时~24小时,在必要的时候可延长至48小时。
2.系列生化反应试验:在试验培养基接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶的同时,可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(氢离子浓度指数7.2)、氰化钾培养基;也可在初步判断结果后,从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。在36摄氏度±1摄氏度的温度中培养18小时~24小时,必要时可延长至48小时。将已挑菌落的平板储存于2摄氏度~5摄氏度或室温至少保留24小时,以备必要时复查。
五、血清学鉴定
在载玻片靠近磨砂的一边滴生理盐水以做对照,在另一边滴一滴血清。在三糖铁琼脂培养基的斜面用灭菌后的接种环取一点菌种,放进血清中,然后用酒精灯将接种环灭菌冷却后,在生理盐水中放入少量菌种。观察菌落是否在血清中凝结,同时与生理盐水中的菌落进行对比。
沙门氏菌的检测要通过以上5个步骤,这种检测也可以运用于临床医学上,可用于针对沙门氏菌感染的检测中,以此可以检测是否含有沙门氏菌,从而判断疾病是否由沙门氏菌引起。
(作者供职于镇平县人民医院检验科), http://www.100md.com