PCR实验室检测的流程
□王清
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR，又称无细胞分子克隆或特异性DNA(脱氧核糖核酸)序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由变性、退火及延伸等反应构成一个周期，可循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有高特异性、高灵敏性、高丰产量等特点。此方法在分子生物学、微生物学、遗传学等多领域都被广泛应用。PCR技术是最常用的检测乙型肝炎病毒DNA的方法，可以检测血液标本中迅速生成的乙型肝炎病毒DNA片段。临床基因扩增实验室也称为PCR实验室。那么，PCR实验室检测的流程是怎样的？有哪些注意事项呢？
检测的流程
PCR实验室一般分为试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区，这4个区域在空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应处于完全分隔的状态。
试剂准备区 PCR反应液中含有特定的核苷酸、DNA聚合酶及引物，根据检测项目所需要的试剂比例进行相应的配制。
样品制备区 按照标准操作流程，在此区提取样品中的DNA或RNA(核糖核酸)，并加入扩增反应管中。
扩增区 将准备好的扩增反应管转移到PCR热循环仪内，设置好扩增程序，对这些样品进行反应，最终获得所期望的扩增结果。
产物分析区 对模板产物进行检测，对扩增片段进一步分析测定，比如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等，对检测结果进行全面的分析，最终得出正确结论。
注意事项
实验室是通过扩增检测特定的DNA或RNA，进行疾病诊断、治疗检测和预后判定的实验室。医疗机构应当集中设置，统一管理，并通过临床检验中心的认证及验收。
检测人员 PCR实验室的检测人员要通过临检中心培训考核，并取得PCR上岗证。同时，实验室人员要定期参加培训考核，实验过程中严格按照标准操作流程，做好个人防护。
操作环境 PCR实验室要求各区必须有足够的空间，温、湿度符合相关要求，建立严格的管理制度，并有防污染措施，要求无基因、无核酸，以保证实验室的安全和检测结果的准确性。
设备、耗材 日常要做好维护、保养。实验中使用的一次性离心管、吸头，要做好密封性、漏液检测，各区的耗材不能混用。
实验过程 要制定符合实际工作情况的标准操作流程，并严格按照标准操作流程进行实验，做好风险评估与风险管理控制，防止发生实验室污染。
质量控制 质量控制是一项很重要的工作，要做好检测过程中的质控工作，以保证检测结果的准确性。
报告 对于最终的检验结果，要慎重下结论，必要时重复实验。经过严密的对比，确定没有疏漏的情况下，才能下最终的结论，避免出现误诊、漏诊，影响患者的治疗。
总之，进行PCR实验室检测要严密且谨慎，要按照标准操作流程进行。
(作者供职于山东省肥城市人民医院), http://www.100md.com
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR，又称无细胞分子克隆或特异性DNA(脱氧核糖核酸)序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由变性、退火及延伸等反应构成一个周期，可循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有高特异性、高灵敏性、高丰产量等特点。此方法在分子生物学、微生物学、遗传学等多领域都被广泛应用。PCR技术是最常用的检测乙型肝炎病毒DNA的方法，可以检测血液标本中迅速生成的乙型肝炎病毒DNA片段。临床基因扩增实验室也称为PCR实验室。那么，PCR实验室检测的流程是怎样的？有哪些注意事项呢？
检测的流程
PCR实验室一般分为试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区，这4个区域在空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应处于完全分隔的状态。
试剂准备区 PCR反应液中含有特定的核苷酸、DNA聚合酶及引物，根据检测项目所需要的试剂比例进行相应的配制。
样品制备区 按照标准操作流程，在此区提取样品中的DNA或RNA(核糖核酸)，并加入扩增反应管中。
扩增区 将准备好的扩增反应管转移到PCR热循环仪内，设置好扩增程序，对这些样品进行反应，最终获得所期望的扩增结果。
产物分析区 对模板产物进行检测，对扩增片段进一步分析测定，比如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等，对检测结果进行全面的分析，最终得出正确结论。
注意事项
实验室是通过扩增检测特定的DNA或RNA，进行疾病诊断、治疗检测和预后判定的实验室。医疗机构应当集中设置，统一管理，并通过临床检验中心的认证及验收。
检测人员 PCR实验室的检测人员要通过临检中心培训考核，并取得PCR上岗证。同时，实验室人员要定期参加培训考核，实验过程中严格按照标准操作流程，做好个人防护。
操作环境 PCR实验室要求各区必须有足够的空间，温、湿度符合相关要求，建立严格的管理制度，并有防污染措施，要求无基因、无核酸，以保证实验室的安全和检测结果的准确性。
设备、耗材 日常要做好维护、保养。实验中使用的一次性离心管、吸头，要做好密封性、漏液检测，各区的耗材不能混用。
实验过程 要制定符合实际工作情况的标准操作流程，并严格按照标准操作流程进行实验，做好风险评估与风险管理控制，防止发生实验室污染。
质量控制 质量控制是一项很重要的工作，要做好检测过程中的质控工作，以保证检测结果的准确性。
报告 对于最终的检验结果，要慎重下结论，必要时重复实验。经过严密的对比，确定没有疏漏的情况下，才能下最终的结论，避免出现误诊、漏诊，影响患者的治疗。
总之，进行PCR实验室检测要严密且谨慎，要按照标准操作流程进行。
(作者供职于山东省肥城市人民医院), http://www.100md.com