壮药千斤拔饮片HPLC特征指纹图谱及多成分含量测定(2)
2.7.2 仪器精密度试验
取供试品溶液，按上述的色谱条件连续进样6 次，计算各化合物峰面积RSD。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3.0%，表明进样的精密度良好。
2.7.3 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0 h、2 h、4 h、8 h和12 h，按上述的色谱条件连续进样6 次，计算各化合物峰面积RSD。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3.0%，表明该溶液在12 h内稳定。
2.7.4 重复性试验
取千斤拔饮片药材6 份，按2.3项下方法平行制取供试品溶液并测定，计算各化合物峰面积RSD。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3.0%，表明重复性良好。
2.7.5 加样回收率
取千斤拔饮片药材3份，分别精密加入4种对照品适量，按2.3项下方法平行制取供试品溶液并测定，计算各化合物回收率。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E回收率在95%～105%区间内。RSD均小于3%。
2.7.6 含量测定
取2.3项下样品进行含量测定，以峰面积代入标准曲线方程进行计算，得到各有效成分含量。平行3份。结果见表2。
3. 讨论
目前国内有学者对千斤拔的化学成分有初步研究，并从千斤拔中分离得到11个化合物，分别鉴定为豆甾醇、硬脂酸、β-谷甾醇、染料木苷和染料木素等。本研究采用甲醇超声提取，简单易操作[4，5]。色谱条件本研究选择，Agilent ZOBAX C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈和0.1%甲酸溶液梯度洗脱，检测波长：254 nm，各峰得到有效分离，各峰型较好，且基线也较平稳。共发现10个共有峰，通过对照品比对指认其中的4个有效成分，并建立它们的含量测定方法，测定10批样品中各成分含量。本实验建立了壮药千斤拔饮片HPLC 指纹图谱，方法简单、快捷，能系统快速地评价壮药千斤拔饮片的药品质量，为控制该药质量提供参考依据。
参考文献：
[1]蒙蒙，闫利華，宋小妹，等. 蔓性千斤拔药材的 HPLC 特征指纹图谱[J]. 中国中药杂志，2011，36(9)：1202-1206.
[2]李宝强. 云南蕊木，大叶千斤拔化学成分及千斤拔指纹图谱研究[D]. 北京：中国科学院研究生院，2007.
[3]王帅，王慧，张丽华，等. 林下参与栽培参扩增片段长度多态性指纹图谱鉴定[J]. 中国药学杂志，2013，48(9)：677-680.
[4]戴先芝，任朝琴，刘圆. 共有峰率和变异峰率双指标序列法分析不同产地 2 种千斤拔紫外指纹图谱研究[J]. 亚太传统医药，2008，4(12)：16-19.
[5]任朝琴，刘圆，袁玮. 大叶千斤拔与蔓性千斤拔的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究[J]. 时珍国医国药，2010，21(11)：2945-2947.
基金项目：广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题(Z2016008), http://www.100md.com(林玲 胡耶芳)
取供试品溶液，按上述的色谱条件连续进样6 次，计算各化合物峰面积RSD。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3.0%，表明进样的精密度良好。
2.7.3 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0 h、2 h、4 h、8 h和12 h，按上述的色谱条件连续进样6 次，计算各化合物峰面积RSD。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3.0%，表明该溶液在12 h内稳定。
2.7.4 重复性试验
取千斤拔饮片药材6 份，按2.3项下方法平行制取供试品溶液并测定，计算各化合物峰面积RSD。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3.0%，表明重复性良好。
2.7.5 加样回收率
取千斤拔饮片药材3份，分别精密加入4种对照品适量，按2.3项下方法平行制取供试品溶液并测定，计算各化合物回收率。染料木素、染料木苷、5，7，4′-三羟基- 6-异戊烯基异黄酮和flemiphilippinin E回收率在95%～105%区间内。RSD均小于3%。
2.7.6 含量测定
取2.3项下样品进行含量测定，以峰面积代入标准曲线方程进行计算，得到各有效成分含量。平行3份。结果见表2。
3. 讨论
目前国内有学者对千斤拔的化学成分有初步研究，并从千斤拔中分离得到11个化合物，分别鉴定为豆甾醇、硬脂酸、β-谷甾醇、染料木苷和染料木素等。本研究采用甲醇超声提取，简单易操作[4，5]。色谱条件本研究选择，Agilent ZOBAX C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈和0.1%甲酸溶液梯度洗脱，检测波长：254 nm，各峰得到有效分离，各峰型较好，且基线也较平稳。共发现10个共有峰，通过对照品比对指认其中的4个有效成分，并建立它们的含量测定方法，测定10批样品中各成分含量。本实验建立了壮药千斤拔饮片HPLC 指纹图谱，方法简单、快捷，能系统快速地评价壮药千斤拔饮片的药品质量，为控制该药质量提供参考依据。
参考文献：
[1]蒙蒙，闫利華，宋小妹，等. 蔓性千斤拔药材的 HPLC 特征指纹图谱[J]. 中国中药杂志，2011，36(9)：1202-1206.
[2]李宝强. 云南蕊木，大叶千斤拔化学成分及千斤拔指纹图谱研究[D]. 北京：中国科学院研究生院，2007.
[3]王帅，王慧，张丽华，等. 林下参与栽培参扩增片段长度多态性指纹图谱鉴定[J]. 中国药学杂志，2013，48(9)：677-680.
[4]戴先芝，任朝琴，刘圆. 共有峰率和变异峰率双指标序列法分析不同产地 2 种千斤拔紫外指纹图谱研究[J]. 亚太传统医药，2008，4(12)：16-19.
[5]任朝琴，刘圆，袁玮. 大叶千斤拔与蔓性千斤拔的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究[J]. 时珍国医国药，2010，21(11)：2945-2947.
基金项目：广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题(Z2016008), http://www.100md.com(林玲 胡耶芳)