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编号:6269
总册15(检验科1352-1417).doc
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    第八十一章临床检验

    第一节 临床血液学检验

    血常规检查

    【 标本 】

    抗凝静脉血(有些仪器也可用末梢血)。

    【 方法 】

    血液细胞自动分析仪测定法。

    【 试剂 】

    血液细胞自动分析仪配套试剂。

    【 操作 】

    详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。

    【 附注 】

    1. 血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有相应的手工方法,详见有关资料。

    2. 半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为:

    (1)静脉血能正确地反映病人实际情况,重复性好;

    (2)利于延长仪器的使用寿命;

    (3)解决了采血盘的交叉感染问题等。

    3. 血细胞计数应用EDTA·K2:为抗凝剂(EDTA·K2·2 H2O 1.5~2.2mg可抗凝1ml血)。

    4. 贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h;如需制作血涂片应在2h内完成。

    5. 测定前必须将EDTA·K2抗凝血充分混匀。

    6. 血细胞分析仪测定最适温度为18~22℃,低于15℃或高于30℃,均可使细胞体积发生改变,影响各参数的结果。

    7. 血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段,当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显

    升高或降低;白细胞分类出现异常结果(中间细胞群百分率≥8.0%);红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况,须用显微镜检查及分类。

    嗜酸性粒细胞直接计数

    【 标本 】

    末梢血或抗凝静脉血。

    【 方法 】

    直接计数法。

    【 试剂 】

    1. Hinkelmann液;

    2. 乙醇- 伊红稀释液;

    3. 伊红- 丙酮稀释液。

    【 操作 】

    1.小试管中加稀释液0.38ml。

    2.常法取末梢血20ul,加入管内混匀,待红细胞溶解后两侧充池。

    3.静置3~5min ,用低倍镜(必要时用高倍镜)镜下计数10个大方格内嗜酸性粒细胞数。总数×20×106=嗜酸性粒细胞/L。

    【 附注 】

    1. 血液稀释后应于1 h 内计数完毕。

    2. 充池前要充分混匀,但又不宜用力过猛。

    3. 住院病人采集标本时间力求统一,以免受日间生理变化的影响。

    红细胞沉降率测定

    【 标本 】

    抗凝静脉血。

    【 方法 】

    魏氏法。

    【 试剂 】

    109mmol/L枸橼酸钠溶液。

    【 操作 】

    1. 3mm×100mm试管1支,在2ml容量处刻上记号,加抗凝剂0.4ml。

    2. 静脉采血后,取下针头,加血至刻度,旋转混合。

    3. 用血沉管(300mm×2.5mm)吸取上述混匀血液至" 0 " 刻度处,拭去管外附着的血液,将管垂直立在血沉架上。

    4. 记时,室温中静置1h,观察血浆高度,以红细胞下沉的毫米数报告之。

    【 附 注 】

    1. 红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质,血浆中脂类的量和质,红细胞的大小与数量,是否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置是否垂直,室温高低等因素都有关系。

    2. 标本采集时应空腹。

    3. 血液和抗凝剂的比例要准确。

    4. 血沉管内径要标准(2.5mm),放置要垂直。

    5. 做血沉的标本要在采集后3h 内测定,并充分混匀。

    6. 室温过低、过高和贫血时,对结果有影响。为此,血沉应尽量放在18~25℃室温下测定。室温过高时血沉加快,可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢,无法校正。

    网织红细胞计数

    【 标本 】

    末梢血或抗凝静脉血。

    【 方法 】

    百分计数法。

    【 试剂 】

    10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或10g/L煌焦油蓝ACD溶液。

    【 操作 】

    1. 于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。

    2. 加入末梢血或静脉血2 滴于上述试管中,混匀。

    3. 静置15~20min 后,取用1 滴制成薄片。

    4. 油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数,以百分率或绝对值报告。

    【 附注 】

    1. 活体染色时间不能过短,室温低时,放37℃温箱。

    2. 网织红细胞也可用Miller窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。

    嗜碱性点彩红细胞计数

    【 标本 】

    末梢血。

    【 方法 】

    百分计数法。

    【 试剂 】

    1. 甲醇;

    2. 碱性亚甲基蓝染液(保存2~3周)。

    【 操作 】

    1. 按常法制成薄血片,自然干燥后,用甲醇固定3min。

    2. 用碱性亚甲基蓝染液染色1~2min,水洗待干。

    3. 用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数,以百分率报告。

    【 附注 】

    1. 用碱性亚甲基蓝染液染色后,红细胞呈浅蓝绿色,嗜碱性点彩呈深蓝色。

    2. 也可用瑞氏染色,嗜碱性点彩呈蓝黑色。

    3. 由于点彩红细胞分布不匀,必要时扩大计数红细胞数。

    红斑狼疮细胞检查

    【 标本 】

    静脉血。

    【 方法 】

    改良血块法。

    【 操作 】

    1. 抽取患者血液2~3ml ,注于干燥试管内,于室温待凝。

    2. 于凝固刚形成时,用竹签将凝块搅碎,并将残余凝块除去。

    3. 以2000r/分钟离心沉淀10分钟 ,使白细胞聚集在同一层面,以利于狼疮细胞形成。

    4. 置37℃温箱内温育2h。

    5. 取出白细胞层及其上下各少许,置红细胞比积管中,以2000r/分钟离心,沉淀10分钟。

    6. 吸去上层液,轻轻吸取白细胞层,制成薄片3~4张。

    7. 以瑞氏染液染色、镜检。

    【 附注 】

    1. 整个操作时间不能超过3h。

    2. 注意与果馅细胞鉴别。

    一氧化碳血红蛋白定性试验

    【 标本 】

    末梢血。

    【 试剂 】

    50g/LNaOH。

    【 操作 】

    1. 取试管2支,各加蒸馏水3~5ml,一管加患者血液三滴,另一管加正常人对照血3滴,混匀。此时,如患者血中有一氧化碳,则血液呈樱桃红色。

    2. 每管各加50g/LNaOH1滴,轻轻混合,正常对照管呈绿褐色,如患者血液中有一氧化碳血红蛋白,则溶血液仍呈樱桃红色,为阳性;如与正常对照色泽一致为阴性。

    【 附注 】

    1. 观察结果须及时,否则樱桃红色逐渐退去,不易分辨。

    2. 本试验敏感性较差,血液中一氧化碳含量到一定程度时才显阳性。如患者事先已采取通气措施,血中一氧化碳含量下降,试验可阴性。但临床症状、体征仍可能存在。

    ( 徐宝贵朱 炎 )

    第二节体液及排泄物检查

    尿液检验

    尿常规检查

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 方法 】

    化学试带法。

    【 试剂 】

    各型号尿液化学分析仪配套试带。

    【 操 作 】

    详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。

    【 附注 】

    1. 尿常规检查使用尿液化学分析仪,目前能进行8~10项检测(PH、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞)。这些项目亦有相应的手工方法,详见有关资料。

    2. 必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。

    3. 要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异,必要时用手工法复查。

    4. 尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段,当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果(如尿蛋白"+"或以上)时,应进行镜检。

    5. 尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。

    本-周氏(Bence-Jones)蛋白定性检查

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 方法 】

    热沉淀反应法。

    【 试剂 】

    1. 200g/L磺基水杨酸溶液;

    2. 2mol/L醋酸盐缓冲溶液(pH4.9±0.1)。

    【 操作 】

    1. 先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查,如呈阴性反应,则可认为尿液标本中本-周氏蛋白阴性。

    2. 取透明尿液4ml于试管中,再加入醋酸盐缓冲液1ml,混匀后,放置56℃水浴中15分钟。如有浑浊或出现沉淀,再将试管放入沸水中,煮沸3分钟,观察试管中浑浊或沉淀的变化,如浑浊变清、浑浊减弱或沉淀减少,均提示本- 周氏蛋白阳性。若煮沸后,浑浊增加或沉淀增多,表明此尿液中还有其它蛋白质,此时应将试管从沸水中取出,立即过滤。如滤液开始透明,温度下降后浑浊,再煮沸时又透明,提示本- 周氏蛋白为阳性。

    【 附注 】

    1. 过多的本- 周氏蛋白,在90℃以上不易完全溶解,故需与对照管比较,也可将尿液稀释后再测。

    2. 煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时,动作要迅速,并需保持高温,否则本- 周氏蛋白也会滤去。

    肌红蛋白定性试验

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 试剂 】

    1. 10g/L 邻甲联苯胺(о- tolidine)溶液;

    2. 过氧化氢醋酸溶液;

    3. 硫酸铵粉末。

    【 操作 】

    1. 首先测试尿液中有无血红素的存在,即依次加入新鲜尿液4滴,邻甲联苯胺溶液2滴,混和后,加入过氧化氢醋酸溶液3滴,如有蓝色或蓝绿色出现,表示尿中有Hb或/ 及Mb的存在。

    2. 离心或过滤使尿液透明,吸取5ml,加入硫酸铵粉末2.8g,使之溶解混合,约为80% 饱和度,静置5 分钟,用滤纸过滤。取滤液重复测试有无血红素存在,如仍有,表示Mb阳性。如不显蓝色,表示血红素已被硫酸铵沉淀,为Hb阳性。

    【 附注 】

    1. 标本必须新鲜,并避免剧烈搅拌。

    2. 本法为过筛试验,在少数正常人中可出现假阳性。

    尿含铁血黄素定性试验

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 方法 】

    罗斯(Rous)法

    【 试剂 】

    1.20g/L亚铁氰化钾水溶液(用时新鲜配制);

    2.3 %盐酸。

    【 操作 】

    1. 取混匀的新鲜尿液15ml,以2000r/min离心5min,倾去上清液。

    2. 在沉渣中加入新鲜配制的20g/L亚铁氰化钾水溶液及3%盐酸液各2ml,充分混匀,室温静置10min。

    3. 再离心沉淀,取沉淀物涂片,加盖玻片后用高倍镜(必要时用油镜)检查。

    4. 如见有分散或成堆蓝色闪光颗粒(直径1~3um)即为阳性,如在细胞内则更为可信。

    【 附注 】

    1. 所有试管、玻片、试剂均应防止铁剂污染,以免出现假阳性。

    2. 一般应做阴性对照,如亚铁氰化钾与盐酸混和后即显深蓝色,表示试剂已污染高铁,不宜再用。

    尿乳糜定性检查

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 试剂 】

    1. 乙醚(AR);

    2. 苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液。

    【 操作 】

    1. 取尿5~10ml,加乙醚2~3ml,混合振摇后,使脂肪溶于乙醚。静置数分钟后,2000r/min离心5min。

    2. 吸取乙醚与尿液的界面层涂片,加苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液1滴。

    3. 镜检观察是否有红色脂肪小滴。

    【 附注 】

    1. 尿液中加少量饱和氢氧化钠,再加乙醚,有助于澄清。

    2. 将分离的乙醚层隔水蒸干,若留有油状沉淀,也可加苏丹Ⅲ,镜检证实有无脂肪小滴。

    尿胆色素原定性试验

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 试剂 】

    1. 对二甲氨基苯甲醛试剂;

    2. 饱和醋酸钠溶液;

    3. 氯仿;

    4. 正丁醇。

    【 操作 】

    1. 在试管中,加入尿标本2ml及对二甲氨基苯甲醛试剂2ml,混合。

    2. 立即加饱和醋酸钠溶液4ml,混合,加氯仿3ml,振摇混合后,上层水溶液呈红色者为阳性反应。

    3. 阳性结果应用下法证实:如尿胆原含量多,用一次氯仿不能完全抽提尿胆原,应多次用氯仿抽提,直至氯仿层呈淡粉红色或无色为止,再观察上层水溶液色泽。如上层水溶液为红色时,再加正丁醇4ml抽提,如水溶液仍呈红色则证实尿中胆色素元为阳性。

    【 附注 】

    1. 醋酸钠溶液必须为饱和液。

    2. 当尿胆色素原浓度太高时,应将尿标本稀释25~100倍。

    3. 尿液必须新鲜,不能久置。

    尿苯丙酮酸定性试验

    【 标本 】

    新鲜尿液。

    【 方法 】......(后略) ......