有关肝硬化免疫学检查
免疫指标不是肝功能的直接指标，但由于肝脏承担了体内蛋白质及其他物质的合成与代谢，因此能直接或间接地影响与调节机体的免疫状态，通过对血清ig及补体的检测，可在一定程度上反映受检者肝脏的疾病和损伤。免疫免疫功能的检测主要包括体液免疫(免疫球蛋白、补体)和细胞免疫的测定。
1.免疫球蛋白和补体测定 肝脏不是兔疫球蛋白的合成场所，但对血清中免疫球蛋白含量起重要的调节作用。这种调节作用表现在：影响肠道内抗原物质的吸收及处理、通过库普弗细胞对抗原呈现特殊递呈作用/卜体静脉侧支循环HJ将肠道来源的抗原直接暴露在全身免疫系统而诱导机体大量抗体的产牛等，肝病是导致外周血免疫球蛋白非特异仕升高的六大病种之一。急仕肝炎多为lgM1高(卜一1(大广 慢性肝炎kG、kA皆升高，以k(Z为主。肝硬化则k(i、18A、18M皆升高.f巴以lgA it高为显著。肝癌则lgM降低，lgA升高最明显；当然以k这些变化是相对而言.并下是绝对的
补体与肝脏的关系更为密切，部分补体及其抑制H子山肝脏合成.肝脏的感染和炎症后应。】刺激机体免疫系统.导致血清总杯体is件及其他补作成5肝内含量增加.这种现象可见于项后较好的急性病毒性肝炎早期。当肝实质受到严重损伤时，补体成分的合成相应减少，这种减少往往在肝病的晚期，同时伴有显著的肝功能受损 此外任何造成肝实质损伤与肝脏血流动力学变化均叮导致循环免疫复合物在外周血中的积聚.其结果导致对补体的过量激活，使血清中补体含量消耗性降低，急性降低多见于急性重症肝炎，慢性消耗性减低主要发生在多种补体成分自身免疫。什疾病、自身免疫性肝炎、肝硬化及其他原因导致的肝病晚期。
2.细胞免疫功能测定 包括体内法和体外法.两种方法在基础免疫中已有详述，这卫只将最新的检查力法—一流人细胞仪检查法作些介绍。
流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是 20世纪 80年代发展起来的一坝利用流式细胞仪进行分析的新技术。流式细胞术集激光术、微电脑、单克隆抗体技术、细胞色素化学于一体，形成了快速、准确的分析和细胞分选技术方法。FCM在临床和基础研究中的价值主要体现于免疫表型分析、DNA含量分析和细胞分选三个方面。其中免疫表型分析在细胞免疫功能测定中起着重要作用。原理是用细胞表面特异性单克隆抗体与细胞作用，再利用荧光结合的第二抗体与之作用。通过抗原抗体反应，使阳性细胞标上荧光，此为间接标记法；或将特异性单抗先标记上荧光再直接与细胞结合发光，此为直接标记法。当细胞流经流式细胞仪，激光束(488urn)对高速通过的细胞流照射，使荧光染料产生不同波长的散射光，光信号收集后经由PMT(光电倍增管)放大并加以分析处理，在短时内可获取细胞大小、核质比、荧光强度和阳性百分比等数据，较之荧光显微镜分析具有客观、快速、信息量大，统计处理准确等优点。应用FCM对细胞免疫功能的检测主要用于：
(1)对细胞分群和细胞亚群的分析 利用CD45/CD14可以分出外周血中的白细胞和单核细胞，在白细胞内利用 CD3、CD19、CD20、CD3一/(CD16+56)十等标记进一步可分出T、B淋巴细胞和NK细胞等。在T细胞内又有CD4/CDS标志的T辅助/诱导和T抑制/杀伤亚群，利用 CD4/CD29、CDS/CD28标志可以将T4、TS进一步分出谷亚群。
(2)检测淋巴细胞的活化CD3/HLA-DR、CD3/CD25、CD69等都是活化T淋巴细胞的特异性标记，另有C17单抗是活化的细胞毒T淋巴细胞的标志物。其比值的改变对病情监测，疗效判断有重要的指导意义。
(3)一些特殊的标志如CD4/CD8比值是AIDS、自身免疫性疾病病程监测的重要指标。q
常用免疫表型分析单抗及正常值见表分3。
表5-3 常用外周血表型分析值 (+/-)表示加减
CD分类 意义 正常值(百分数)X(+/-)2S
-——————一——————————-————一 一———一—一————————————一—————一———————————-—————
CD3 总T淋巴细胞 65.86(+/-)9.60
CD2 花环形成细胞 77.46(+/-)9.27
CD4 T辅助/T诱导亚群 37.53(+/-)8.91
CD4+/CD29- 辅助性T细胞 21.22(+/-)8.98
CD4+/CD29+ 辅助细胞诱导亚群 16.86(+/-)5.30
CD29 辅助和抑制细胞诱导亚群 59.45(+/-)12.49
CD8 T抑制/T杀伤亚群 28.01(+/-)10.13
CD8+/CD28- T抑制细胞亚群 16.96(+/-)9.35
CD8+/CD28+ T杀伤细胞亚群 11.73(+/-)3.44
CD3-/CD(16+56)+ 自然杀伤细胞 16.27(+/-)8.50
CD19 总B细胞 11 .74(+/-)3.37
CD25 IL-2Ra链 14.34(+/-)0.14
CD4/CD8比值 1.53(+/-)0.71 153十0 71
外周血取自上海市46名职员献血者。
总之，肝硬化时山有以厂化度学改变：细胞免疫检查则发现半数以上患者T淋巴细胞数低于正常。T细胞及其亚群的单克隆抗体检测，结果常示CD3降低、CD4略低、CD8无多大改变，CD4/IgM均可升高。一般以 IgG增高为最显著，与r-球蛋白升高相平行。lgG增高的机制系由于肠原性多种抗原物质经吸收至肝脏后，不能被肝脏库普弗细胞吞噬和降解，或通过门脉侧支循环直接进入体循环，引起的免疫反向。此外，部分患者环可出现非特异性自身抗体，如抗核抗体、平滑肌抗体等。
1.免疫球蛋白和补体测定 肝脏不是兔疫球蛋白的合成场所，但对血清中免疫球蛋白含量起重要的调节作用。这种调节作用表现在：影响肠道内抗原物质的吸收及处理、通过库普弗细胞对抗原呈现特殊递呈作用/卜体静脉侧支循环HJ将肠道来源的抗原直接暴露在全身免疫系统而诱导机体大量抗体的产牛等，肝病是导致外周血免疫球蛋白非特异仕升高的六大病种之一。急仕肝炎多为lgM1高(卜一1(大广 慢性肝炎kG、kA皆升高，以k(Z为主。肝硬化则k(i、18A、18M皆升高.f巴以lgA it高为显著。肝癌则lgM降低，lgA升高最明显；当然以k这些变化是相对而言.并下是绝对的
补体与肝脏的关系更为密切，部分补体及其抑制H子山肝脏合成.肝脏的感染和炎症后应。】刺激机体免疫系统.导致血清总杯体is件及其他补作成5肝内含量增加.这种现象可见于项后较好的急性病毒性肝炎早期。当肝实质受到严重损伤时，补体成分的合成相应减少，这种减少往往在肝病的晚期，同时伴有显著的肝功能受损 此外任何造成肝实质损伤与肝脏血流动力学变化均叮导致循环免疫复合物在外周血中的积聚.其结果导致对补体的过量激活，使血清中补体含量消耗性降低，急性降低多见于急性重症肝炎，慢性消耗性减低主要发生在多种补体成分自身免疫。什疾病、自身免疫性肝炎、肝硬化及其他原因导致的肝病晚期。
2.细胞免疫功能测定 包括体内法和体外法.两种方法在基础免疫中已有详述，这卫只将最新的检查力法—一流人细胞仪检查法作些介绍。
流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是 20世纪 80年代发展起来的一坝利用流式细胞仪进行分析的新技术。流式细胞术集激光术、微电脑、单克隆抗体技术、细胞色素化学于一体，形成了快速、准确的分析和细胞分选技术方法。FCM在临床和基础研究中的价值主要体现于免疫表型分析、DNA含量分析和细胞分选三个方面。其中免疫表型分析在细胞免疫功能测定中起着重要作用。原理是用细胞表面特异性单克隆抗体与细胞作用，再利用荧光结合的第二抗体与之作用。通过抗原抗体反应，使阳性细胞标上荧光，此为间接标记法；或将特异性单抗先标记上荧光再直接与细胞结合发光，此为直接标记法。当细胞流经流式细胞仪，激光束(488urn)对高速通过的细胞流照射，使荧光染料产生不同波长的散射光，光信号收集后经由PMT(光电倍增管)放大并加以分析处理，在短时内可获取细胞大小、核质比、荧光强度和阳性百分比等数据，较之荧光显微镜分析具有客观、快速、信息量大，统计处理准确等优点。应用FCM对细胞免疫功能的检测主要用于：
(1)对细胞分群和细胞亚群的分析 利用CD45/CD14可以分出外周血中的白细胞和单核细胞，在白细胞内利用 CD3、CD19、CD20、CD3一/(CD16+56)十等标记进一步可分出T、B淋巴细胞和NK细胞等。在T细胞内又有CD4/CDS标志的T辅助/诱导和T抑制/杀伤亚群，利用 CD4/CD29、CDS/CD28标志可以将T4、TS进一步分出谷亚群。
(2)检测淋巴细胞的活化CD3/HLA-DR、CD3/CD25、CD69等都是活化T淋巴细胞的特异性标记，另有C17单抗是活化的细胞毒T淋巴细胞的标志物。其比值的改变对病情监测，疗效判断有重要的指导意义。
(3)一些特殊的标志如CD4/CD8比值是AIDS、自身免疫性疾病病程监测的重要指标。q
常用免疫表型分析单抗及正常值见表分3。
表5-3 常用外周血表型分析值 (+/-)表示加减
CD分类 意义 正常值(百分数)X(+/-)2S
-——————一——————————-————一 一———一—一————————————一—————一———————————-—————
CD3 总T淋巴细胞 65.86(+/-)9.60
CD2 花环形成细胞 77.46(+/-)9.27
CD4 T辅助/T诱导亚群 37.53(+/-)8.91
CD4+/CD29- 辅助性T细胞 21.22(+/-)8.98
CD4+/CD29+ 辅助细胞诱导亚群 16.86(+/-)5.30
CD29 辅助和抑制细胞诱导亚群 59.45(+/-)12.49
CD8 T抑制/T杀伤亚群 28.01(+/-)10.13
CD8+/CD28- T抑制细胞亚群 16.96(+/-)9.35
CD8+/CD28+ T杀伤细胞亚群 11.73(+/-)3.44
CD3-/CD(16+56)+ 自然杀伤细胞 16.27(+/-)8.50
CD19 总B细胞 11 .74(+/-)3.37
CD25 IL-2Ra链 14.34(+/-)0.14
CD4/CD8比值 1.53(+/-)0.71 153十0 71
外周血取自上海市46名职员献血者。
总之，肝硬化时山有以厂化度学改变：细胞免疫检查则发现半数以上患者T淋巴细胞数低于正常。T细胞及其亚群的单克隆抗体检测，结果常示CD3降低、CD4略低、CD8无多大改变，CD4/IgM均可升高。一般以 IgG增高为最显著，与r-球蛋白升高相平行。lgG增高的机制系由于肠原性多种抗原物质经吸收至肝脏后，不能被肝脏库普弗细胞吞噬和降解，或通过门脉侧支循环直接进入体循环，引起的免疫反向。此外，部分患者环可出现非特异性自身抗体，如抗核抗体、平滑肌抗体等。