抑癌基因OPCML的克隆及其在卵巢癌中的功能研究
http://www.100md.com
参见附件(194kb)。
姚德生 1 李 力 1 Kenneth Garson 2 Barbara C. Vanderhyden 2
1 广西医科大学肿瘤医院妇瘤科
2 加拿大渥太华大学癌症中心
本项目研究获美国 NIH 研究基金 (CA84242) 、加拿大国家癌症研究基金 (NCIC 014175) 和广西回国基金 ( 桂科回 0575020) 资助
【摘要】目的 为了解 OPCML 在卵巢癌中的功能 , 以及慢病毒载体( lentiviral vector )作为体外转基因工具的高效性和可行性。 方法 根据 GenBank 上的序列，从 CD1 小鼠上克隆了 OPCML 基因，将之克隆到慢病毒载体 pWPI-GFP ，构建了慢病毒表达质粒 pWPI-OPCML ，将 pWPI-OPCML+pCMV.dR874 +pMDG 共转染 293T 细胞获得携带有 OPCML 的重组慢病毒，用病毒上清感染靶细胞( A2780 ， OCC1 ， RM 及 MOSE )，通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验及体内成瘤试验等来研究 OPCML 在卵巢癌中的功能。 结果 ( 1 ) OPCML 能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞，效率几乎达 100% ，同时达到稳定的表达， Western blot 能检测到 OPCML(60kDa) 和 GFP(27kDa) 蛋白。 ( 2 ) 细胞增殖试验显示，在 A2780 和 RM 细胞，转入 OPCML 后细胞的增殖明显的比未转基因( A2780 ， RM )或仅转空载体( A2780-pWPI 和 RM-PWPI )者慢( P <0.01 )，但在 OCC1 细胞系， OPCML 对细胞的增殖无明显的影响( P >0.05 )；( 3 ) FCM (流式细胞仪)对细胞周期检测显示 OPCML 对 A2780 细胞的细胞周期有明显的滞留作用，但对 OCC1 、 RM 、 MOSE 细胞无明显滞留作用( P >0.05 )；( 4 )细胞聚合力试验显示 OPCML 能明显增强细胞的粘附力；( 5 )移植瘤试验显示，将 A2780-OPCML 注射到裸皮下，仅有一个( 1/4 )有肿瘤生长，体积显著的小于 A2780 及 A2780-pWPI 组( P <0.001 ) ; 但在 RM 组， RM-OPCML 和对照组 RM-pWPI 之间肿瘤大小和成瘤情况无明显差异( P >0.05 )。 结论 重组的慢病毒作为转基因的工具，具有高效，同时能使目的基因达到持续稳定的表达； OPCML 能够抑制 A2780 ， RM 生长； OPCML 能够增加细胞的粘附能力，抑制肿瘤的转移；在体内能肿瘤的形成和生长，可能是一个新的抑癌基因。
【关键词】 慢病毒载体； 卵巢癌； OPCML ； 基因转移； 移植瘤模型
【 Abstract 】 Objective To study the function of OPCML in ovarian cancer , also check the reliability of lentiviral vector transgene system. Methods OPCML gene was cloned from CD1 mouse according to the sequence in GenBank., and subcloned to a lentiviral vector pWPI-GFP, constructed the lentivirus expressional plasmid pWPI-OPCML. Recombinant lentiviruses that carrying OPCML were produced by co-transfection of pWPI-OPCML+pCMV -dR874 +pMDG to 293T, then infected ovarian cancer cell lines (A2780, OCC1, RM et al) by recombinant lentiviruses. Observed the phenotypic characteristics by cell proliferation assay, cell Aggregation assay in vivo and xenograft assay in vivo. Results (1) OPCML can be transfer to target cells by Recombinant lentiviruses, the infection efficiency was nearly 100%; OPCML(60kDa) and GFP(27kDa) protein can be expressed stable and detected by Western blot in target cells; (2) Cell proliferation assay showed A2780-OPCML and RM-OPCML grow slowly comparing to parent cells that only tranfered empty vector(pWPI-GFP) ( P <0.01 ) , but there is no difference in OCC1 and the normal MOSE ( P >0.05 ) . (3) FCM assay showed OPCML can arrest cell cycle in A2780 cell line ( P <0.05); but in RM, OCC1, MOSE cell lines, OPCML can't influence the cell cycles. (4) Cell aggregation assay showed ， OPCML can enhance the ability of adhesion; (5) Xenograft experiment showed A2780-OPCML only 1/4 nude mice can formated tumor, the tumor is also smaller compared to A2780 and A2780-pWPI( P <0.001); but for the RM-OPCML and RM-pWPI, they don't have any difference ( P >0.05 ) . OPCML protein can be detected by immunohistichemical staining in the tumor tissue. Conclusions Recombinant lentiviruses have high infection efficiency, the OPCML can be deliveried and expressed stable; OPCML can enhance the ability of adhesion, inhibit A2780 proliferation and tumor formation. OPCML should be a new tumor suppressor gene. ......
姚德生 1 李 力 1 Kenneth Garson 2 Barbara C. Vanderhyden 2
1 广西医科大学肿瘤医院妇瘤科
2 加拿大渥太华大学癌症中心
本项目研究获美国 NIH 研究基金 (CA84242) 、加拿大国家癌症研究基金 (NCIC 014175) 和广西回国基金 ( 桂科回 0575020) 资助
【摘要】目的 为了解 OPCML 在卵巢癌中的功能 , 以及慢病毒载体( lentiviral vector )作为体外转基因工具的高效性和可行性。 方法 根据 GenBank 上的序列，从 CD1 小鼠上克隆了 OPCML 基因，将之克隆到慢病毒载体 pWPI-GFP ，构建了慢病毒表达质粒 pWPI-OPCML ，将 pWPI-OPCML+pCMV.dR874 +pMDG 共转染 293T 细胞获得携带有 OPCML 的重组慢病毒，用病毒上清感染靶细胞( A2780 ， OCC1 ， RM 及 MOSE )，通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验及体内成瘤试验等来研究 OPCML 在卵巢癌中的功能。 结果 ( 1 ) OPCML 能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞，效率几乎达 100% ，同时达到稳定的表达， Western blot 能检测到 OPCML(60kDa) 和 GFP(27kDa) 蛋白。 ( 2 ) 细胞增殖试验显示，在 A2780 和 RM 细胞，转入 OPCML 后细胞的增殖明显的比未转基因( A2780 ， RM )或仅转空载体( A2780-pWPI 和 RM-PWPI )者慢( P <0.01 )，但在 OCC1 细胞系， OPCML 对细胞的增殖无明显的影响( P >0.05 )；( 3 ) FCM (流式细胞仪)对细胞周期检测显示 OPCML 对 A2780 细胞的细胞周期有明显的滞留作用，但对 OCC1 、 RM 、 MOSE 细胞无明显滞留作用( P >0.05 )；( 4 )细胞聚合力试验显示 OPCML 能明显增强细胞的粘附力；( 5 )移植瘤试验显示，将 A2780-OPCML 注射到裸皮下，仅有一个( 1/4 )有肿瘤生长，体积显著的小于 A2780 及 A2780-pWPI 组( P <0.001 ) ; 但在 RM 组， RM-OPCML 和对照组 RM-pWPI 之间肿瘤大小和成瘤情况无明显差异( P >0.05 )。 结论 重组的慢病毒作为转基因的工具，具有高效，同时能使目的基因达到持续稳定的表达； OPCML 能够抑制 A2780 ， RM 生长； OPCML 能够增加细胞的粘附能力，抑制肿瘤的转移；在体内能肿瘤的形成和生长，可能是一个新的抑癌基因。
【关键词】 慢病毒载体； 卵巢癌； OPCML ； 基因转移； 移植瘤模型
【 Abstract 】 Objective To study the function of OPCML in ovarian cancer , also check the reliability of lentiviral vector transgene system. Methods OPCML gene was cloned from CD1 mouse according to the sequence in GenBank., and subcloned to a lentiviral vector pWPI-GFP, constructed the lentivirus expressional plasmid pWPI-OPCML. Recombinant lentiviruses that carrying OPCML were produced by co-transfection of pWPI-OPCML+pCMV -dR874 +pMDG to 293T, then infected ovarian cancer cell lines (A2780, OCC1, RM et al) by recombinant lentiviruses. Observed the phenotypic characteristics by cell proliferation assay, cell Aggregation assay in vivo and xenograft assay in vivo. Results (1) OPCML can be transfer to target cells by Recombinant lentiviruses, the infection efficiency was nearly 100%; OPCML(60kDa) and GFP(27kDa) protein can be expressed stable and detected by Western blot in target cells; (2) Cell proliferation assay showed A2780-OPCML and RM-OPCML grow slowly comparing to parent cells that only tranfered empty vector(pWPI-GFP) ( P <0.01 ) , but there is no difference in OCC1 and the normal MOSE ( P >0.05 ) . (3) FCM assay showed OPCML can arrest cell cycle in A2780 cell line ( P <0.05); but in RM, OCC1, MOSE cell lines, OPCML can't influence the cell cycles. (4) Cell aggregation assay showed ， OPCML can enhance the ability of adhesion; (5) Xenograft experiment showed A2780-OPCML only 1/4 nude mice can formated tumor, the tumor is also smaller compared to A2780 and A2780-pWPI( P <0.001); but for the RM-OPCML and RM-pWPI, they don't have any difference ( P >0.05 ) . OPCML protein can be detected by immunohistichemical staining in the tumor tissue. Conclusions Recombinant lentiviruses have high infection efficiency, the OPCML can be deliveried and expressed stable; OPCML can enhance the ability of adhesion, inhibit A2780 proliferation and tumor formation. OPCML should be a new tumor suppressor gene. ......
您现在查看是摘要介绍页，详见DOC附件(194kb)。