丝虫病诊断标准及处理原则GB 15985
http://www.100md.com
参见附件(42KB)。
丝虫病诊断标准及处理原则GB 15985-1995
根据《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》制定本标准。
1 主题内容与适用范围
本标准规定了丝虫病(班氏丝虫病和马来丝虫病)各期，即微丝蚴血症、急性丝虫病和慢性丝虫病的诊断标准、治疗方法及防治原则。
本标准适用于疫区专业机构开展丝虫病防治工作和各级卫生防疫、医疗保健机构对丝虫病患者的诊治。
2 诊断原则
根据流行季节丝虫病流行区居住史、临床表现以及病原学检查、血清免疫学检查等予以诊断。
3 诊断标准
3.1 微丝蚴血症
3.1.1 流行季节流行区居住史。
3.1.2 夜间采血检查微丝蚴阳性。
确诊病例：具备3.1.2。
3.2 急性丝虫病
3.2.1 流行季节流行区居住史。
3.2.2 有反复发作的非细菌感染性肢体(或阴囊、女性乳房)淋巴结炎/淋巴管炎(或精索炎、睾丸炎、附睾炎)，局部疼痛、触痛、肿胀、温热感，或有丹毒样皮炎，症状持续超过3天，伴有发热、头痛、不适等全身症状。
注：马来丝虫病急性炎症局限于肢体。
3.2.3 夜间采血检查微丝蚴阳性。
3.2.4 间接荧光抗体试验或酶联免疫吸附试验检测抗体阳性。
疑似病例：具备3.2.1、3.2.2。
确诊病例：疑似病例加3.2.3或疑似病例加3.2.4。
3.3 慢性丝虫病
3.3.1 较长期流行区居住史。
3.3.2 有不对称性肢体淋巴水肿、象皮肿、鞘膜积液、乳糜尿以及阴囊或女性乳房肿大(马来丝虫病慢性体征局限于肢体淋巴水肿、象皮肿，且肿胀处限于膝、肘关节远端)。或兼有3.2.2的表现。
3.3.3 夜间采血检查微丝蚴阳性。
3.3.4 间接荧光抗体试验或酶联免疫吸附试验检测抗体阳性。
3.3.5 在尿、淋巴液、鞘膜积液(或其他抽出液)内查见微丝蚴，在淋巴管、淋巴结内查见成虫，或在病理组织切片查见丝虫断面。
疑似病例：具备3.3.1、3.3.2。
确诊病例：疑似病例加3.3.5或3.3.3或3.3.4。
4 处理原则
4.1 病原治疗
4.1.1 个体治疗
4.1.1.1 班氏丝虫病
一般用海群生(乙胺嗪)总剂量4.2g7天疗法(总量70～84mg/kg)，即每次0.2g，每天3次，连服7天(成人量，儿童用量应递减，孕妇、哺乳期妇女及有严重疾患者应缓治或免予治疗，下同)为一疗程，需复治2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.1.2 马来丝虫病
一般用海群生总量2g的4天或2天疗法(总量33～40mg/kg)，即0.5g顿服，连续4天或0.5g，每天2次连续2天，复治2～3个疗程，间隔半月以上。对微丝蚴密度较高者，首次治疗宜用海群生1g 10天微量递增疗法(即第1～4天，每天12.5mg；第5～7天，每天25mg；第8～9天，每天50mg；第10天补足1.0g顿服)。
4.1.2 群体治疗
4.1.2.1 班氏丝虫病
4.1.2.1.1 人群微丝蚴率在10%～20%的地区，于血检普查后，采用全民普服0.3%海群生药盐6个月(海群生总量约9g)，对检出的微丝蚴血症者再用海群生3g 5天疗法，即每次0.3g，每天2次，5天为一疗程，治疗2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.2.1.2 人群微丝蚴率在5%～10%的地区，于血检整群抽样调查后，全民普服0.3%海群生药盐6个月。
4.1.2.1.3 人群微丝蚴率在5%以下地区，采取普查，对微丝蚴血症者用海群生3g 5天疗法治疗2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.2.2 马来丝虫病
4.1.2.2.1 人群微丝蚴率在5%～10%的地区，采取普查，对微丝蚴血症者用海群生总剂量2g的4天或2天疗法治疗3～4个疗程，间隔半月以上；亦可采取全民普服0.3%海群生药盐4～6个月。
4.1.2.2.2 人群微丝蚴率在5%以下地区，采取普查，对微丝蚴血症者用海群生2g的4天或2天疗法治疗2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.2.2.3 群体治疗时间以冬、春季节为宜。
4.2 对症治疗(详见附录C)
4.3 媒介防治
4.3.1 结合环境整治和新农村建设，清除蚊媒孳生地。
4.3.2 提倡使用蚊帐、纱窗、纱门等防蚊设备和应用驱蚊剂。
4.3.3 在有嗜人按蚊的马来丝虫病流行区，可结合疟疾防治开展杀虫剂室内灭蚊。 附录A
病原学检查
(补充件)
A1 血液检查
A1.1 厚血膜法
A1.1.1 血片制作：于晚9时至翌晨2时，以酒精棉球消毒耳垂(或指端)待干，用三棱针快速深刺，轻挤出血液，取血3大滴，约等于60μL，置于已编号的清洁载玻片上，涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或长方形厚血膜(约长3cm、宽1.5cm)，平放于有盖的玻片盒内，以防落灰或虫吃。
A1.1.2 血片染色：次日，将经自然干燥的血片放入清水中溶血5～10min，至血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色，鉴定虫种及保存宜用吉氏液或苏木素染色。
A1.1.2.1 硼砂美蓝染色法：取美蓝2g，硼砂3g，置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中，加蒸馏水100mL配成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5mL加清水配成5%稀释液，染3～5min，使血膜呈天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。
A1.1.2.2 吉氏染色法：染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后倾入100mL玻塞瓶内，用甲醇小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55～60℃温箱内24h或室温下3～5天，即为原液，放置愈久染色效果愈佳，临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1min，然后滴加10%染液(原液加清水稀释配成)染45min，用蒸馏水轻轻冲洗。
A1.1.2.3 德氏苏木素染色法；染液由A液即铵明矾饱和液(铵明钒20g、蒸馏水100mL)；B液(苏木素结晶1g加纯酒精10mL)；C液(甘油25mL加甲醇25mL)配成。将B液逐滴加入A液中，倒入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加入C液，密封备用。血片溶血固定步骤同前。用上述染液染10～20min，用0.05%～0.1%稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。
A1.1.3 血片镜检：将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数，根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，予以识别。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。
A1.1.4 班氏与马来微丝蚴形态鉴别要点见表A1。
表 A1
A1.2 微丝蚴浓集法
A1.2.1 改良蒸馏水法：取静脉血1mL(取血时间同A1.1)，置于盛有0.4mL3.8%枸椽酸钠的离心管内，混匀后加蒸馏水8～10mL，反复摇匀，待红细胞溶解后经每分钟3000转离心3～5min，倾去上液，加0.05mol/L氢氧化钠8～10mL，按住管口，用力振荡数次，放置5～10min，使纤维蛋白凝块迅速溶解，再离心，吸除上清液，将沉渣涂片，待干、染色、镜检。
A1.2.2 微孔膜过滤法：将已编号的直径25mm、孔径5μm的微孔薄膜经蒸馏水漂洗后装入过滤器内，滤膜下垫一张同样大小经生理盐水润湿的滤纸。用注射器取静脉血1mL(取血时间同A1.1)，加5%构椽酸钠0.1mL抗凝，吸入10%聚氧乙烯脂肪醇硫酸钠[或可用2%吐温80、0.1%碳酸氢钠或10%聚氧乙烯脂肪醉硫酸钠(ES)]溶液9mL，混匀后，去针头，直接插入过滤器，缓慢推动注射器，使已溶血的血液通过滤膜，以10mL生理盐水洗涤滤膜3次。开启过滤器，取出薄膜，自然晾干后，置热苏木素中染色5min，水洗，待干，镜检。
A2 淋巴液、鞘膜积液、乳糜尿内微丝蚴的检查
A2.1 淋巴液、鞘膜积液(或其他抽出液)：直接涂片或用生理盐水稀释10倍离心后检查沉渣。液体蛋白含量高而呈胶状易凝者，加抗凝剂后检查。
A2.2 乳糜尿(或乳糜积液)：取乳糜尿4mL于试管中，加乙醚2mL，混合振摇，使乳糜中脂肪充分溶解，弃去上层脂肪，加水稀释10倍后离心检查。
A3 活体组织检查
A3.1 检查淋巴管、淋巴结内成虫：将手术取出的结节，用大头针固定于木板或软木板上，分离结节周围组织，仔细将病变的淋巴管壁切开，分离内容物，取出干酪样脓样物检查。如于结节出现2周以后切除、解剖，则管内脓样物可能已纤维化。脓样物内含大量巨噬细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞及夏雷晶体。将干酪样物或纤维组织移至玻片上，加数滴生理盐水，然后用解剖针将外层组织分离，即可见被包围的成虫。时间较久者发生粘连，虫体成碎段，不易将虫体与组织分离，则可用一针将包围的组织固定，另一针将虫体沿其长轴向一端轻移，或将组织移至盛有生理盐水的培养皿中，使虫体半浮，较易分离。但如结节形成较久，则不易取得完整的成虫。成虫或虫段可保存于甘油酒精(70%酒精95mL，甘油5mL)中供鉴定。
A3.2 病理组织学检查：切下可疑的淋巴结、淋巴管结节或其他组织，用10%中性甲醛固定1～2天，移至70%酒精中作病理切片。在切片中除可发现丝虫成虫外，尚可见到嗜酸粒细胞、网状内皮细胞、淋巴细胞、浆细胞、纤维母细胞、异物巨细胞、肉芽肿、假结核、纤维组织增生、淋巴管周围炎、管腔内肉芽组织增生形成栓塞或息肉状阻塞管腔等病理变化。在切片中所见结构清楚的雌虫体内的微丝蚴体核清晰，所在淋巴管壁有少量浆细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润，而无纤维素沉积或肉芽肿形成者，则成虫可能为活虫。如虫体周围有较多的嗜酸粒细胞和散在的组织，虫体被炎细胞包绕形成肉芽肿，纤维化后形成纤维化结节，或结节内虫体已钙化，则均为死虫。如出现中性粒细胞浸润、渗出，内膜内皮细胞肿大、增生，则为继发性细菌感染。
附录B
血清免疫学检查
(补充件)
B1 间接荧光抗体试验(IFAT)
B1.1 抗原片
B1.1.1 马来丝虫成虫冰冻切片抗原：用马来丝虫感染期幼虫腹腔感染长爪沙鼠。6个月后，从感染鼠腹腔收集雌性成虫。用生理盐水洗涤2次，蒸馏水漂洗1次，包埋于3%～5%甲基纤维素中，用冷冻切片机制成厚4～5μm的切片(每一切片含4～6个虫体横断面)，贴附于洁净的载玻片上，用丙酮固定，干燥保存于-20℃备用。
B1.1.2 马来微丝蚴断片抗原：从感染马来丝虫的长爪沙鼠腹腔液中收集马来微丝蚴，用PBS(或生理盐水)洗净。其悬液置冰格过夜，次日离心浓集，以甲醇固定，然后进行反复超声断碎，超声粉碎机输出功率不小于25W(每次30s，间隔30～60s，共3～5min)，至微丝蚴断片为长20～30μm。滴1滴微丝蚴断片悬液(≥100断片/滴)在洁净的载玻片上，经50℃左右热烘固定3min后使用。
B1.2 血样：血清或滤纸血。
B1.2.1 血清：采集受检者的静脉血或末梢血，离心后收集血清。在低温下运送，4℃保存，-20℃可保存2年左右。其间不宜反复冻融，以免影响抗体效价。
B1.2.2 滤纸干血滴：用定量新华滤纸从受检者的耳垂或指尖取血，使血滴直径为1.2cm，血量约20μL(约相当血清10μL)，编号、晾干后放入有干燥剂的塑料袋内低温保存。4℃可保存半年，-20℃可保存2年。
B1.3 操作方法：受检血清用pH8.0、0.01mol/L PBS稀释成1∶10或1∶20(每一滤纸干血滴在0.1或0.2mL的PBS液中浸泡30min)。从冰箱取出抗原片，待复温后，在每一切片或一滴抗原上加1滴稀释待检血清，置37℃湿育30min。用PBS洗3次(每次5min)后冷风吹干，滴加用PBS稀释的羊抗人IgG荧光抗体，同上湿育，洗涤，以0.01%伊文思蓝作背景染色2min，同上洗涤，吹干。再加缓冲甘油(pH8.0)后覆以盖玻片在荧光显微镜下检查。对阳性反应的血样需连续作倍比稀释检测，直至阴性反应为止。最后呈阳性反应的稀释度即为阳性终点滴度。
B1.4 反应标准
B1.4.1 马来丝虫成虫切片抗原，以虫体切面的荧光强度及荧光着色范围区分为4个等级："-"虫体切面呈桔红色，无明显的黄绿色荧光；"+"一般亮度的黄绿色荧光，显色范围较局限；"++"中等亮度的黄绿色荧光，显色较广泛；"+++"明亮的黄绿色荧光，显色广泛。一般以1：20血样滴度时荧光反应强度呈"+"及其以上者，判为阳性。
B1.4.2 微丝蚴断片抗原，以微丝蚴断片的荧光强度及着色范围区分成4个等级："-"微丝蚴断端呈模糊的淡黄绿色或红色："+"断端呈黄绿色荧光，形似哑铃，反衬红色明显；"++"断端黄绿色荧光显著，膜上也有黄绿色荧光；"+++"断端和膜均呈明亮的黄绿色荧光。一般以1：10血样滴度时出现"+"及其以上的荧光反应，判为阳性。
B2 酶联免疫吸附试验(ELISA)
B2.1 抗原：马来丝虫成虫可溶性抗原，从感染马来丝虫长爪沙鼠的腹腔收集马来丝虫成虫。虫体经生理盐水洗涤和蒸馏水漂洗后，置丙酮脱脂干燥，然后加0.01%硫柳汞生理盐水研磨成匀浆，冻融3天(每天2次)后置4℃冷浸3～4天，超声粉碎后低温高速(7000r/min)离心30min，上清液即可溶性抗原。用分光光度仪测定235和280nm波长处的光密度值(OD)，按式(B1)计算抗原蛋白量：
X(mg/mL)＝(OD(下标始)235(下标终)-OD(下标始)280(下标终))×0.4...........................(B1)
B2.2 操作方法
B2.2.1 常规间接ELISA：用pH9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲液将抗原按适宜的工作浓度(2～5μg/孔)稀释，包被聚苯乙烯反应板，每孔加0.3mL，4℃过夜。次日倾去抗原液，用pH7.2 PBS/吐温-20(PBS/T)洗涤3次，每次5min，甩干。受检血清(或滤纸干血滴)用PB3/T稀释成1∶200，每孔加0.3mL，每样本加3孔，置湿盒于37℃湿育2h，同上洗涤，甩干。每孔加入0.3mL PBS/T的辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG，同上湿育，洗涤，甩干。然后加底物溶液[邻苯二胺40mg，柠檬酸-磷酸盐缓冲液50mL，蒸馏水50mL和30%过氧化氢(H(下标始)2(下标终)O(下标始)2(下标终))40μL〕0.3mL同上湿育，最后每孔加2mol/L硫酸(H(下标始)2(下标终)SO(下标始)4(下标终))75μL终止反应。将每样品3孔的液量吸至比色杯(杯径1cm)，在分光光度仪上测量492nm波长处的光密度(OD)值。每板均设阳性参考血清、阴性参考血清和空白对照孔。测得样品OD值进行校正。......（后略) ......
丝虫病诊断标准及处理原则GB 15985-1995
根据《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》制定本标准。
1 主题内容与适用范围
本标准规定了丝虫病(班氏丝虫病和马来丝虫病)各期，即微丝蚴血症、急性丝虫病和慢性丝虫病的诊断标准、治疗方法及防治原则。
本标准适用于疫区专业机构开展丝虫病防治工作和各级卫生防疫、医疗保健机构对丝虫病患者的诊治。
2 诊断原则
根据流行季节丝虫病流行区居住史、临床表现以及病原学检查、血清免疫学检查等予以诊断。
3 诊断标准
3.1 微丝蚴血症
3.1.1 流行季节流行区居住史。
3.1.2 夜间采血检查微丝蚴阳性。
确诊病例：具备3.1.2。
3.2 急性丝虫病
3.2.1 流行季节流行区居住史。
3.2.2 有反复发作的非细菌感染性肢体(或阴囊、女性乳房)淋巴结炎/淋巴管炎(或精索炎、睾丸炎、附睾炎)，局部疼痛、触痛、肿胀、温热感，或有丹毒样皮炎，症状持续超过3天，伴有发热、头痛、不适等全身症状。
注：马来丝虫病急性炎症局限于肢体。
3.2.3 夜间采血检查微丝蚴阳性。
3.2.4 间接荧光抗体试验或酶联免疫吸附试验检测抗体阳性。
疑似病例：具备3.2.1、3.2.2。
确诊病例：疑似病例加3.2.3或疑似病例加3.2.4。
3.3 慢性丝虫病
3.3.1 较长期流行区居住史。
3.3.2 有不对称性肢体淋巴水肿、象皮肿、鞘膜积液、乳糜尿以及阴囊或女性乳房肿大(马来丝虫病慢性体征局限于肢体淋巴水肿、象皮肿，且肿胀处限于膝、肘关节远端)。或兼有3.2.2的表现。
3.3.3 夜间采血检查微丝蚴阳性。
3.3.4 间接荧光抗体试验或酶联免疫吸附试验检测抗体阳性。
3.3.5 在尿、淋巴液、鞘膜积液(或其他抽出液)内查见微丝蚴，在淋巴管、淋巴结内查见成虫，或在病理组织切片查见丝虫断面。
疑似病例：具备3.3.1、3.3.2。
确诊病例：疑似病例加3.3.5或3.3.3或3.3.4。
4 处理原则
4.1 病原治疗
4.1.1 个体治疗
4.1.1.1 班氏丝虫病
一般用海群生(乙胺嗪)总剂量4.2g7天疗法(总量70～84mg/kg)，即每次0.2g，每天3次，连服7天(成人量，儿童用量应递减，孕妇、哺乳期妇女及有严重疾患者应缓治或免予治疗，下同)为一疗程，需复治2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.1.2 马来丝虫病
一般用海群生总量2g的4天或2天疗法(总量33～40mg/kg)，即0.5g顿服，连续4天或0.5g，每天2次连续2天，复治2～3个疗程，间隔半月以上。对微丝蚴密度较高者，首次治疗宜用海群生1g 10天微量递增疗法(即第1～4天，每天12.5mg；第5～7天，每天25mg；第8～9天，每天50mg；第10天补足1.0g顿服)。
4.1.2 群体治疗
4.1.2.1 班氏丝虫病
4.1.2.1.1 人群微丝蚴率在10%～20%的地区，于血检普查后，采用全民普服0.3%海群生药盐6个月(海群生总量约9g)，对检出的微丝蚴血症者再用海群生3g 5天疗法，即每次0.3g，每天2次，5天为一疗程，治疗2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.2.1.2 人群微丝蚴率在5%～10%的地区，于血检整群抽样调查后，全民普服0.3%海群生药盐6个月。
4.1.2.1.3 人群微丝蚴率在5%以下地区，采取普查，对微丝蚴血症者用海群生3g 5天疗法治疗2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.2.2 马来丝虫病
4.1.2.2.1 人群微丝蚴率在5%～10%的地区，采取普查，对微丝蚴血症者用海群生总剂量2g的4天或2天疗法治疗3～4个疗程，间隔半月以上；亦可采取全民普服0.3%海群生药盐4～6个月。
4.1.2.2.2 人群微丝蚴率在5%以下地区，采取普查，对微丝蚴血症者用海群生2g的4天或2天疗法治疗2～3个疗程，间隔半月以上。
4.1.2.2.3 群体治疗时间以冬、春季节为宜。
4.2 对症治疗(详见附录C)
4.3 媒介防治
4.3.1 结合环境整治和新农村建设，清除蚊媒孳生地。
4.3.2 提倡使用蚊帐、纱窗、纱门等防蚊设备和应用驱蚊剂。
4.3.3 在有嗜人按蚊的马来丝虫病流行区，可结合疟疾防治开展杀虫剂室内灭蚊。 附录A
病原学检查
(补充件)
A1 血液检查
A1.1 厚血膜法
A1.1.1 血片制作：于晚9时至翌晨2时，以酒精棉球消毒耳垂(或指端)待干，用三棱针快速深刺，轻挤出血液，取血3大滴，约等于60μL，置于已编号的清洁载玻片上，涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或长方形厚血膜(约长3cm、宽1.5cm)，平放于有盖的玻片盒内，以防落灰或虫吃。
A1.1.2 血片染色：次日，将经自然干燥的血片放入清水中溶血5～10min，至血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色，鉴定虫种及保存宜用吉氏液或苏木素染色。
A1.1.2.1 硼砂美蓝染色法：取美蓝2g，硼砂3g，置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中，加蒸馏水100mL配成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5mL加清水配成5%稀释液，染3～5min，使血膜呈天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。
A1.1.2.2 吉氏染色法：染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后倾入100mL玻塞瓶内，用甲醇小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55～60℃温箱内24h或室温下3～5天，即为原液，放置愈久染色效果愈佳，临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1min，然后滴加10%染液(原液加清水稀释配成)染45min，用蒸馏水轻轻冲洗。
A1.1.2.3 德氏苏木素染色法；染液由A液即铵明矾饱和液(铵明钒20g、蒸馏水100mL)；B液(苏木素结晶1g加纯酒精10mL)；C液(甘油25mL加甲醇25mL)配成。将B液逐滴加入A液中，倒入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加入C液，密封备用。血片溶血固定步骤同前。用上述染液染10～20min，用0.05%～0.1%稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。
A1.1.3 血片镜检：将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数，根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，予以识别。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。
A1.1.4 班氏与马来微丝蚴形态鉴别要点见表A1。
表 A1
A1.2 微丝蚴浓集法
A1.2.1 改良蒸馏水法：取静脉血1mL(取血时间同A1.1)，置于盛有0.4mL3.8%枸椽酸钠的离心管内，混匀后加蒸馏水8～10mL，反复摇匀，待红细胞溶解后经每分钟3000转离心3～5min，倾去上液，加0.05mol/L氢氧化钠8～10mL，按住管口，用力振荡数次，放置5～10min，使纤维蛋白凝块迅速溶解，再离心，吸除上清液，将沉渣涂片，待干、染色、镜检。
A1.2.2 微孔膜过滤法：将已编号的直径25mm、孔径5μm的微孔薄膜经蒸馏水漂洗后装入过滤器内，滤膜下垫一张同样大小经生理盐水润湿的滤纸。用注射器取静脉血1mL(取血时间同A1.1)，加5%构椽酸钠0.1mL抗凝，吸入10%聚氧乙烯脂肪醇硫酸钠[或可用2%吐温80、0.1%碳酸氢钠或10%聚氧乙烯脂肪醉硫酸钠(ES)]溶液9mL，混匀后，去针头，直接插入过滤器，缓慢推动注射器，使已溶血的血液通过滤膜，以10mL生理盐水洗涤滤膜3次。开启过滤器，取出薄膜，自然晾干后，置热苏木素中染色5min，水洗，待干，镜检。
A2 淋巴液、鞘膜积液、乳糜尿内微丝蚴的检查
A2.1 淋巴液、鞘膜积液(或其他抽出液)：直接涂片或用生理盐水稀释10倍离心后检查沉渣。液体蛋白含量高而呈胶状易凝者，加抗凝剂后检查。
A2.2 乳糜尿(或乳糜积液)：取乳糜尿4mL于试管中，加乙醚2mL，混合振摇，使乳糜中脂肪充分溶解，弃去上层脂肪，加水稀释10倍后离心检查。
A3 活体组织检查
A3.1 检查淋巴管、淋巴结内成虫：将手术取出的结节，用大头针固定于木板或软木板上，分离结节周围组织，仔细将病变的淋巴管壁切开，分离内容物，取出干酪样脓样物检查。如于结节出现2周以后切除、解剖，则管内脓样物可能已纤维化。脓样物内含大量巨噬细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞及夏雷晶体。将干酪样物或纤维组织移至玻片上，加数滴生理盐水，然后用解剖针将外层组织分离，即可见被包围的成虫。时间较久者发生粘连，虫体成碎段，不易将虫体与组织分离，则可用一针将包围的组织固定，另一针将虫体沿其长轴向一端轻移，或将组织移至盛有生理盐水的培养皿中，使虫体半浮，较易分离。但如结节形成较久，则不易取得完整的成虫。成虫或虫段可保存于甘油酒精(70%酒精95mL，甘油5mL)中供鉴定。
A3.2 病理组织学检查：切下可疑的淋巴结、淋巴管结节或其他组织，用10%中性甲醛固定1～2天，移至70%酒精中作病理切片。在切片中除可发现丝虫成虫外，尚可见到嗜酸粒细胞、网状内皮细胞、淋巴细胞、浆细胞、纤维母细胞、异物巨细胞、肉芽肿、假结核、纤维组织增生、淋巴管周围炎、管腔内肉芽组织增生形成栓塞或息肉状阻塞管腔等病理变化。在切片中所见结构清楚的雌虫体内的微丝蚴体核清晰，所在淋巴管壁有少量浆细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润，而无纤维素沉积或肉芽肿形成者，则成虫可能为活虫。如虫体周围有较多的嗜酸粒细胞和散在的组织，虫体被炎细胞包绕形成肉芽肿，纤维化后形成纤维化结节，或结节内虫体已钙化，则均为死虫。如出现中性粒细胞浸润、渗出，内膜内皮细胞肿大、增生，则为继发性细菌感染。
附录B
血清免疫学检查
(补充件)
B1 间接荧光抗体试验(IFAT)
B1.1 抗原片
B1.1.1 马来丝虫成虫冰冻切片抗原：用马来丝虫感染期幼虫腹腔感染长爪沙鼠。6个月后，从感染鼠腹腔收集雌性成虫。用生理盐水洗涤2次，蒸馏水漂洗1次，包埋于3%～5%甲基纤维素中，用冷冻切片机制成厚4～5μm的切片(每一切片含4～6个虫体横断面)，贴附于洁净的载玻片上，用丙酮固定，干燥保存于-20℃备用。
B1.1.2 马来微丝蚴断片抗原：从感染马来丝虫的长爪沙鼠腹腔液中收集马来微丝蚴，用PBS(或生理盐水)洗净。其悬液置冰格过夜，次日离心浓集，以甲醇固定，然后进行反复超声断碎，超声粉碎机输出功率不小于25W(每次30s，间隔30～60s，共3～5min)，至微丝蚴断片为长20～30μm。滴1滴微丝蚴断片悬液(≥100断片/滴)在洁净的载玻片上，经50℃左右热烘固定3min后使用。
B1.2 血样：血清或滤纸血。
B1.2.1 血清：采集受检者的静脉血或末梢血，离心后收集血清。在低温下运送，4℃保存，-20℃可保存2年左右。其间不宜反复冻融，以免影响抗体效价。
B1.2.2 滤纸干血滴：用定量新华滤纸从受检者的耳垂或指尖取血，使血滴直径为1.2cm，血量约20μL(约相当血清10μL)，编号、晾干后放入有干燥剂的塑料袋内低温保存。4℃可保存半年，-20℃可保存2年。
B1.3 操作方法：受检血清用pH8.0、0.01mol/L PBS稀释成1∶10或1∶20(每一滤纸干血滴在0.1或0.2mL的PBS液中浸泡30min)。从冰箱取出抗原片，待复温后，在每一切片或一滴抗原上加1滴稀释待检血清，置37℃湿育30min。用PBS洗3次(每次5min)后冷风吹干，滴加用PBS稀释的羊抗人IgG荧光抗体，同上湿育，洗涤，以0.01%伊文思蓝作背景染色2min，同上洗涤，吹干。再加缓冲甘油(pH8.0)后覆以盖玻片在荧光显微镜下检查。对阳性反应的血样需连续作倍比稀释检测，直至阴性反应为止。最后呈阳性反应的稀释度即为阳性终点滴度。
B1.4 反应标准
B1.4.1 马来丝虫成虫切片抗原，以虫体切面的荧光强度及荧光着色范围区分为4个等级："-"虫体切面呈桔红色，无明显的黄绿色荧光；"+"一般亮度的黄绿色荧光，显色范围较局限；"++"中等亮度的黄绿色荧光，显色较广泛；"+++"明亮的黄绿色荧光，显色广泛。一般以1：20血样滴度时荧光反应强度呈"+"及其以上者，判为阳性。
B1.4.2 微丝蚴断片抗原，以微丝蚴断片的荧光强度及着色范围区分成4个等级："-"微丝蚴断端呈模糊的淡黄绿色或红色："+"断端呈黄绿色荧光，形似哑铃，反衬红色明显；"++"断端黄绿色荧光显著，膜上也有黄绿色荧光；"+++"断端和膜均呈明亮的黄绿色荧光。一般以1：10血样滴度时出现"+"及其以上的荧光反应，判为阳性。
B2 酶联免疫吸附试验(ELISA)
B2.1 抗原：马来丝虫成虫可溶性抗原，从感染马来丝虫长爪沙鼠的腹腔收集马来丝虫成虫。虫体经生理盐水洗涤和蒸馏水漂洗后，置丙酮脱脂干燥，然后加0.01%硫柳汞生理盐水研磨成匀浆，冻融3天(每天2次)后置4℃冷浸3～4天，超声粉碎后低温高速(7000r/min)离心30min，上清液即可溶性抗原。用分光光度仪测定235和280nm波长处的光密度值(OD)，按式(B1)计算抗原蛋白量：
X(mg/mL)＝(OD(下标始)235(下标终)-OD(下标始)280(下标终))×0.4...........................(B1)
B2.2 操作方法
B2.2.1 常规间接ELISA：用pH9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲液将抗原按适宜的工作浓度(2～5μg/孔)稀释，包被聚苯乙烯反应板，每孔加0.3mL，4℃过夜。次日倾去抗原液，用pH7.2 PBS/吐温-20(PBS/T)洗涤3次，每次5min，甩干。受检血清(或滤纸干血滴)用PB3/T稀释成1∶200，每孔加0.3mL，每样本加3孔，置湿盒于37℃湿育2h，同上洗涤，甩干。每孔加入0.3mL PBS/T的辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG，同上湿育，洗涤，甩干。然后加底物溶液[邻苯二胺40mg，柠檬酸-磷酸盐缓冲液50mL，蒸馏水50mL和30%过氧化氢(H(下标始)2(下标终)O(下标始)2(下标终))40μL〕0.3mL同上湿育，最后每孔加2mol/L硫酸(H(下标始)2(下标终)SO(下标始)4(下标终))75μL终止反应。将每样品3孔的液量吸至比色杯(杯径1cm)，在分光光度仪上测量492nm波长处的光密度(OD)值。每板均设阳性参考血清、阴性参考血清和空白对照孔。测得样品OD值进行校正。......（后略) ......
相关资料1：