胆红素检测.ppt
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参见附件(1579KB)。
胆红素检测: 传统的和其它
Phillip R. Bach, Ph.D.
Primary Children's Medical Center
Salt Lake City, Utah
It doesn't take a rocket scientist...
* Pretty basic stuff.
* Most recent refer-ence in bibliography is from 1998.
* But these issues are at the top of my FAQ list.
* In med school you learn TBil and DBil and that's all.
目的
* 被HPLC分离的胆红素分子类型。
* 检测胆红素的传统和非传统方法。
* 每个检测的或计算的组分分子类型。
目的
* 了解传统和非传统的胆红素检测结果不同的临床应用。
* 光线对胆红素的影响。接受光治疗患者和标本的光降解，对传统和非传统方法结果的影响。
胆红素的结构
* 各胆红素分子上的甲基 (Me) 和乙烯基 (CH2=CH) 有所不同。
* 羧基被结合。
* 折叠的结构几乎不溶于水。
HPLC分离的胆红素各组分
巨细胞肝炎婴儿血清
* ? = 游离胆红素
* ? = 单葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ??= 双葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ? = 和白蛋白共价结合胆红素
△胆红素
* 在血液循环中结合胆红素和白蛋白形成的。
* 白蛋白缓慢地非酶作用置换了原葡萄糖醛酸酯。类似于糖化血红蛋白。
* 在长期的高结合胆红素血症后，才能检测出来。
* 在血液循环中的清除缓慢。半衰期和白蛋白一样，2～3周。
传统的胆红素检测方法
* 偶氮方法 (Ehrlich 1883).
* 由 van den Bergh and Muller (1916)应用于胆红素检测。
* 结合胆红素反应快速。
* 游离胆红素反应缓慢或不反应(分子折叠，不溶性)。
* 需要某些物质的存在，才会打开游离胆红素，使溶解在水，并和偶氮试剂反应。
传统胆红素检测方法
* "加速剂"
* 乙醇 (van den Bergh, 后来是 Malloy 和 Evelyn)
* 咖啡因和苯甲酸钠 (Jendrassik and Grof, 1938)
* 由Doumas领导的AACC小组对J-G方法最佳化 (1983)。
传统胆红素检测方法
* 具有加速剂的偶氮反应 = 总胆红素。
* 不加加速剂的偶氮反应= "直接反应胆红素" (van den Bergh) 或简称为直接胆红素。
* 间接胆红素为总胆红素减去直接胆红素。
* 按照反应条件区分为直接和间接胆红素在先。以后才了解分子结构。
非传统的胆红素检测方法
* HPLC - 临床常规无法使用。
* Vitros(r) 分析仪 (Ortho Clinical Diagnostics, formerly Kodak Ektachem).
* 酶学方法。
* 氧化剂方法。
Vitros 胆红素检测方法
* 现今已广泛应用 (2003年的CAP调查中在4964个实验室中，有1191个使用该法)。
* 总胆红素干片还是传统的偶氮方法。
* BuBc干片(游离胆红素Bu、结合胆红素Bc)为非传统方法。
BuBc干片
* 由Eastman Kodak在 1980s早期开发。
* 使用染媒剂，不是试剂。
* 染媒剂是什么？
* 染媒剂可以区分结合胆红素和游离胆红素的最大反射差。
* 在技术上的一个机遇。
BuBc干片技术原理
* 实线为Bu, 虚线为Bc.
* 反射最大峰: Bu 460, Bc 420 nm.
* 在 400 (二者反射强度相同) 和 460 nm (最大反射差)阅读。
酶法的胆红素检测
* 当前新的非传统胆红素检测方法，但是还没有普遍应用。
* 使用胆红素氧化酶。
* 可以调节反应条件，仅使结合胆红素(不是△胆红素)参与反应。
* 可以在一般分析仪上使用液体试剂。其特殊性和Vitros BuBc 干片技术等当。
不同方法对胆红素的分类
临床应用
Vitros和传统方法的比较
总胆红素就是总胆红素
游离和间接
结合和直接
新生儿溶血症胆红素和总胆红素
* 除了△，就是总胆红素。
真实的结合胆红素优于直接胆红素
* 胆道阻塞解除后，结合胆红素下降迅速。
* 直接(和总)胆红素仍然保持高水平达数周。
* 容易产生误解，认为阻塞没有解决。
为什么直接和总胆红素
不会快速下降？
* 在直接和总胆红素内都包括△胆红素。
* Bc (Vitros 或酶法) 内不包括△胆红素。
* △胆红素的半衰期长 (和白蛋白相同2～3周)。
* 如果在DBIL和TBIL的主要组分为△胆红素，则这二者需要有一段时间才恢复正常。
Bc和DBil的比较
胆红素和光线
* 胆红素对光敏感 (这就是光照治疗的基础)。
* 光降解作用使胆红素溶解度增加，容易排泄。
* 在标本收集管中的标本也会受光的影响。
* 对每个标本收集管用铝箔或黑纸包裹起来，避免光线对胆红素结果的影响。这样的做法不现实。
光线怎样影响胆红素？
构象异构体
构象异构体
结构异构体
光照异构体怎样参与反应？
构象异构体：
* 和偶氮试剂反应。
* 在BuBc 干片上，表现如天然游离胆红素。
结构异构体(环外)：
* 不和偶氮试剂反应。
* 表现和Bu与Bc一样。
构象异构体怎样影响检测结果？
* 若发生在体内，被循环快速清除(这是关键)。
* 若发生在体外，异构体保留在标本中。
* 作为总胆红素的一部分被检测。
* 在Vitros BuBc干片上，作为Bu被检测。
* 但是，直接胆红素无法被检测。
结构异构体怎样影响检测结果？
* 总胆红素降低(偶氮反应)。
* 游离胆红素减少 (Vitros Bu), 但是，不像总胆红素那样迅速降低。
* 结合胆红素增加 (Vitros Bc)。
* 所以，新生儿溶血症 (Vitros) 仍然保持相对恒定 (=Bu?+Bc?)。
* 会出现不平衡的结果：TBil
了解了这些情况后，我们应在新生儿溶血症接受光照治疗时，如何进行监视？
检测什么标本？
* 光解作用发生在皮肤表面数毫米处。
* 血管外？需要数小时才被除去。
检测什么标本？
* 经皮的胆红素计较静脉或动脉血的胆红素结果略低。
* 末梢血标本的结果也比静脉或动脉血的低，尤其是偶氮方法的结果。
* 很多推荐认为：应在光照治疗后，过几个小时再采集标本。
做什么检验？
* 目标：准确地检测患者的天然游离胆红素。
* 总胆红素(偶氮法)只检测天然胆红素。
* Vitros 的游离胆红素 (Bu) 检测天然和构象异构体。
* Vitros 的新生儿胆红素 (Bu+Bc) 检测天然和两种异构体。
* 是否可认为总胆红素检测最好？
光解作用是体内多还是体外多？
* 我认为体外多。
* 如果是事实。那么，我们需要检测标本中的所有胆红素。原先这些胆红素在人体内没有被降解。所以应该检测标本中降解的和天然的胆红素。
* 光照治疗后，Vitros的 Bu 或 NBil 均优于TBil 。
第二个目标：不要遗漏
结合胆红素的出现
* 结合胆红素的出现"总是病理的"。
* 光照治疗时，在检测总胆红素的同时，少量的结合胆红素会检测不出。
* 建议：在监视光照治疗时，至少做一次集合胆红素的检查。
* 如果有Vitros, 最好同时监视结合胆红素、游离胆红素、和新生儿胆红素三者。您可以在一个干片上获得这三个结果。
胆红素检测: 传统的和其它
Phillip R. Bach, Ph.D.
Primary Children's Medical Center
Salt Lake City, Utah
It doesn't take a rocket scientist...
* Pretty basic stuff.
* Most recent refer-ence in bibliography is from 1998.
* But these issues are at the top of my FAQ list.
* In med school you learn TBil and DBil and that's all.
目的
* 被HPLC分离的胆红素分子类型。
* 检测胆红素的传统和非传统方法。
* 每个检测的或计算的组分分子类型。
目的
* 了解传统和非传统的胆红素检测结果不同的临床应用。
* 光线对胆红素的影响。接受光治疗患者和标本的光降解，对传统和非传统方法结果的影响。
胆红素的结构
* 各胆红素分子上的甲基 (Me) 和乙烯基 (CH2=CH) 有所不同。
* 羧基被结合。
* 折叠的结构几乎不溶于水。
HPLC分离的胆红素各组分
巨细胞肝炎婴儿血清
* ? = 游离胆红素
* ? = 单葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ??= 双葡萄糖醛酸酯结合胆红素
* ? = 和白蛋白共价结合胆红素
△胆红素
* 在血液循环中结合胆红素和白蛋白形成的。
* 白蛋白缓慢地非酶作用置换了原葡萄糖醛酸酯。类似于糖化血红蛋白。
* 在长期的高结合胆红素血症后，才能检测出来。
* 在血液循环中的清除缓慢。半衰期和白蛋白一样，2～3周。
传统的胆红素检测方法
* 偶氮方法 (Ehrlich 1883).
* 由 van den Bergh and Muller (1916)应用于胆红素检测。
* 结合胆红素反应快速。
* 游离胆红素反应缓慢或不反应(分子折叠，不溶性)。
* 需要某些物质的存在，才会打开游离胆红素，使溶解在水，并和偶氮试剂反应。
传统胆红素检测方法
* "加速剂"
* 乙醇 (van den Bergh, 后来是 Malloy 和 Evelyn)
* 咖啡因和苯甲酸钠 (Jendrassik and Grof, 1938)
* 由Doumas领导的AACC小组对J-G方法最佳化 (1983)。
传统胆红素检测方法
* 具有加速剂的偶氮反应 = 总胆红素。
* 不加加速剂的偶氮反应= "直接反应胆红素" (van den Bergh) 或简称为直接胆红素。
* 间接胆红素为总胆红素减去直接胆红素。
* 按照反应条件区分为直接和间接胆红素在先。以后才了解分子结构。
非传统的胆红素检测方法
* HPLC - 临床常规无法使用。
* Vitros(r) 分析仪 (Ortho Clinical Diagnostics, formerly Kodak Ektachem).
* 酶学方法。
* 氧化剂方法。
Vitros 胆红素检测方法
* 现今已广泛应用 (2003年的CAP调查中在4964个实验室中，有1191个使用该法)。
* 总胆红素干片还是传统的偶氮方法。
* BuBc干片(游离胆红素Bu、结合胆红素Bc)为非传统方法。
BuBc干片
* 由Eastman Kodak在 1980s早期开发。
* 使用染媒剂，不是试剂。
* 染媒剂是什么？
* 染媒剂可以区分结合胆红素和游离胆红素的最大反射差。
* 在技术上的一个机遇。
BuBc干片技术原理
* 实线为Bu, 虚线为Bc.
* 反射最大峰: Bu 460, Bc 420 nm.
* 在 400 (二者反射强度相同) 和 460 nm (最大反射差)阅读。
酶法的胆红素检测
* 当前新的非传统胆红素检测方法，但是还没有普遍应用。
* 使用胆红素氧化酶。
* 可以调节反应条件，仅使结合胆红素(不是△胆红素)参与反应。
* 可以在一般分析仪上使用液体试剂。其特殊性和Vitros BuBc 干片技术等当。
不同方法对胆红素的分类
临床应用
Vitros和传统方法的比较
总胆红素就是总胆红素
游离和间接
结合和直接
新生儿溶血症胆红素和总胆红素
* 除了△，就是总胆红素。
真实的结合胆红素优于直接胆红素
* 胆道阻塞解除后，结合胆红素下降迅速。
* 直接(和总)胆红素仍然保持高水平达数周。
* 容易产生误解，认为阻塞没有解决。
为什么直接和总胆红素
不会快速下降？
* 在直接和总胆红素内都包括△胆红素。
* Bc (Vitros 或酶法) 内不包括△胆红素。
* △胆红素的半衰期长 (和白蛋白相同2～3周)。
* 如果在DBIL和TBIL的主要组分为△胆红素，则这二者需要有一段时间才恢复正常。
Bc和DBil的比较
胆红素和光线
* 胆红素对光敏感 (这就是光照治疗的基础)。
* 光降解作用使胆红素溶解度增加，容易排泄。
* 在标本收集管中的标本也会受光的影响。
* 对每个标本收集管用铝箔或黑纸包裹起来，避免光线对胆红素结果的影响。这样的做法不现实。
光线怎样影响胆红素？
构象异构体
构象异构体
结构异构体
光照异构体怎样参与反应？
构象异构体：
* 和偶氮试剂反应。
* 在BuBc 干片上，表现如天然游离胆红素。
结构异构体(环外)：
* 不和偶氮试剂反应。
* 表现和Bu与Bc一样。
构象异构体怎样影响检测结果？
* 若发生在体内，被循环快速清除(这是关键)。
* 若发生在体外，异构体保留在标本中。
* 作为总胆红素的一部分被检测。
* 在Vitros BuBc干片上，作为Bu被检测。
* 但是，直接胆红素无法被检测。
结构异构体怎样影响检测结果？
* 总胆红素降低(偶氮反应)。
* 游离胆红素减少 (Vitros Bu), 但是，不像总胆红素那样迅速降低。
* 结合胆红素增加 (Vitros Bc)。
* 所以，新生儿溶血症 (Vitros) 仍然保持相对恒定 (=Bu?+Bc?)。
* 会出现不平衡的结果：TBil
了解了这些情况后，我们应在新生儿溶血症接受光照治疗时，如何进行监视？
检测什么标本？
* 光解作用发生在皮肤表面数毫米处。
* 血管外？需要数小时才被除去。
检测什么标本？
* 经皮的胆红素计较静脉或动脉血的胆红素结果略低。
* 末梢血标本的结果也比静脉或动脉血的低，尤其是偶氮方法的结果。
* 很多推荐认为：应在光照治疗后，过几个小时再采集标本。
做什么检验？
* 目标：准确地检测患者的天然游离胆红素。
* 总胆红素(偶氮法)只检测天然胆红素。
* Vitros 的游离胆红素 (Bu) 检测天然和构象异构体。
* Vitros 的新生儿胆红素 (Bu+Bc) 检测天然和两种异构体。
* 是否可认为总胆红素检测最好？
光解作用是体内多还是体外多？
* 我认为体外多。
* 如果是事实。那么，我们需要检测标本中的所有胆红素。原先这些胆红素在人体内没有被降解。所以应该检测标本中降解的和天然的胆红素。
* 光照治疗后，Vitros的 Bu 或 NBil 均优于TBil 。
第二个目标：不要遗漏
结合胆红素的出现
* 结合胆红素的出现"总是病理的"。
* 光照治疗时，在检测总胆红素的同时，少量的结合胆红素会检测不出。
* 建议：在监视光照治疗时，至少做一次集合胆红素的检查。
* 如果有Vitros, 最好同时监视结合胆红素、游离胆红素、和新生儿胆红素三者。您可以在一个干片上获得这三个结果。
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