ABO血型鉴定.ppt
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参见附件(300KB)。
ABO血型鉴定 不规则抗体筛选
* 玻片法(正定型)
* 试管法(正定型,反定型)
* 盐水法
* 聚凝胺法
* 抗人球法
ABO血型鉴定实验原理
* 抗原抗体反应--在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型
* 抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
试剂
* 抗A、抗B试剂血清
* 5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液
* 受检者血清
* 5%的受检者红细胞悬液 (从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5%红细胞悬液。采血时应注意先用75%酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细胞(约0.2~0.5 ml)用生理盐水洗涤3次，然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。)
四 实验步骤.swf
*1. 玻片法
* (1) 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。
* (2) 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。
* (3) 竹签两头分别混合，搅匀。用两根分别用来混合A型和B型标准
血清和红细胞悬液
* (4)观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。
* (5) 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。
2.试管法(正定型)
*AB
* A标准血清2滴
* B标准血清2滴
* 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴
* 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。
* 取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块，管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完全不凝的试管，血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为均匀的悬液;轻微凝集的，必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。
试管法(反定型)
*AcBc Oc
* 受检者血清 2滴2滴 2滴
* 5%的A型红细胞悬液 1滴
* 5%的B型红细胞悬液 1滴
* 5%的O型红细胞悬液 1滴
* 立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。
* 轻轻扣动试管底部，观察结果----同前
血型判定swf
五 注意事项
* 玻片、试管都要标记!!!， A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯!
* 所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
* 红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。
* 一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。
* 离心时间、速度严格要求，以防假阳 性或假阴性结果。
* 试验用血清和试剂红细胞都应标准化。
* 要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录观察结果。
ABO正反定型结果不一致的常见原因有哪些？
* (1)人为因素：①试剂不标准、失效或污染；③操作中加错样本或试剂、离心速度不足或过度、细胞与血清比例不当、结果判断错误等。
* (2)客观因素：①因某些疾病导致抗原减弱如：白血病，MDS(骨髓增生异常综合征)患者血型抗原减弱导致误定血型。②受检者抗体效价低(如婴幼儿、老年人、大量输液的患者，血浆蛋白低下等)③某些药物干扰如输注右旋糖酐后会干扰血型检定。
为什么这次试验没有安排玻片法的反定型？
*
因为存在于病人或献血者血清中的抗A及抗B，个体差异很大，如果效价较弱，在玻片上不足以凝集大量抗原阳性的红细胞，造成假阴牲的结果所以采用玻片法作反定型的结果常不可靠。而用试管离心法作反定型，则促进抗原抗体反应，形成肉眼可见的凝块，使结果更为可靠
二 实验原理
* 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清(含有抗B抗体)与标准B型血清(含有抗A抗体)中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。 见下表
ABO血型鉴定 不规则抗体筛选
* 玻片法(正定型)
* 试管法(正定型,反定型)
* 盐水法
* 聚凝胺法
* 抗人球法
ABO血型鉴定实验原理
* 抗原抗体反应--在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型
* 抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
试剂
* 抗A、抗B试剂血清
* 5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液
* 受检者血清
* 5%的受检者红细胞悬液 (从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5%红细胞悬液。采血时应注意先用75%酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细胞(约0.2~0.5 ml)用生理盐水洗涤3次，然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。)
四 实验步骤.swf
*1. 玻片法
* (1) 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。
* (2) 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。
* (3) 竹签两头分别混合，搅匀。用两根分别用来混合A型和B型标准
血清和红细胞悬液
* (4)观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。
* (5) 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。
2.试管法(正定型)
*AB
* A标准血清2滴
* B标准血清2滴
* 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴
* 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。
* 取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块，管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完全不凝的试管，血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为均匀的悬液;轻微凝集的，必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。
试管法(反定型)
*AcBc Oc
* 受检者血清 2滴2滴 2滴
* 5%的A型红细胞悬液 1滴
* 5%的B型红细胞悬液 1滴
* 5%的O型红细胞悬液 1滴
* 立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。
* 轻轻扣动试管底部，观察结果----同前
血型判定swf
五 注意事项
* 玻片、试管都要标记!!!， A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯!
* 所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
* 红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。
* 一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。
* 离心时间、速度严格要求，以防假阳 性或假阴性结果。
* 试验用血清和试剂红细胞都应标准化。
* 要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录观察结果。
ABO正反定型结果不一致的常见原因有哪些？
* (1)人为因素：①试剂不标准、失效或污染；③操作中加错样本或试剂、离心速度不足或过度、细胞与血清比例不当、结果判断错误等。
* (2)客观因素：①因某些疾病导致抗原减弱如：白血病，MDS(骨髓增生异常综合征)患者血型抗原减弱导致误定血型。②受检者抗体效价低(如婴幼儿、老年人、大量输液的患者，血浆蛋白低下等)③某些药物干扰如输注右旋糖酐后会干扰血型检定。
为什么这次试验没有安排玻片法的反定型？
*
因为存在于病人或献血者血清中的抗A及抗B，个体差异很大，如果效价较弱，在玻片上不足以凝集大量抗原阳性的红细胞，造成假阴牲的结果所以采用玻片法作反定型的结果常不可靠。而用试管离心法作反定型，则促进抗原抗体反应，形成肉眼可见的凝块，使结果更为可靠
二 实验原理
* 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清(含有抗B抗体)与标准B型血清(含有抗A抗体)中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。 见下表
附件资料：
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