·专栏论著·

    热疗对肿瘤细胞耐药性的影响

    张 萍 王大章 郑光勇 刘曙光

    【摘要】 目的 探讨热疗对肿瘤细胞耐药性的产生和变化的影响。方法 采用 RT- PCR法比较 41 ℃及 37 ℃

    下 Tca8113及 K562P ADM细胞株在体外接受短期化疗后 ,在 mRNA水平上多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋

    白基因(MRP)的表达情况 ,采用荧光分光光度计检测细胞内药物浓度的变化。结果 热疗化疗联合应用对 Tca8113

    及 K562P ADM细胞株抑制作用明显提高;41 ℃下热疗可在 mRNA水平部分逆转 K562P ADM细胞中MDR1和MRP的

    表达 ,并明显升高了 K562P ADM细胞内药物浓度。结论 热疗不仅抑制肿瘤细胞耐药基因的表达 ,同时还有增加细

    胞内的药物浓度、拮抗耐药蛋白的作用 ,从而逆转耐药。

    【关键词】 肿瘤; 多药耐药; 化疗; 热疗

    Reversal Effect of Hyperthemia on Multidrug Resistant Phenomena

    ZHANG Ping ,WANG Dazhang , ZHENG Guangyong , et al . ( Department of Oral and Maxillof icial Surgery , West China College

    of Stomatology , Sichuan University , Chengdu 610041 , China)

    【Abstract】 Objective The purpose of this study was investigate the effect of hyperthemia on multidrug resistance in

    K562P ADM cell .Methods The MDR1 (mulitdrug resistance gene) and MRP (multidrug resistant associated gene) gene expres2

    sions in Tca8113 and K562P ADM cell lines were analyzed by RT- PCR after treated with different cytotoxic drugs and different tem 2

    perature (37 ℃and 41 ℃) . The function and expression of Pgp and MRP were detected by fluorescence photometeric assays.Re2

    sults Inhibition rate of both cells was significantly enhanced by exposure to chemotherapeutic drugs and 41 ℃temperature ; Ex 2

    posing to 41 ℃hyperthemia reduced MDR1 and MRP expression and enhanced intracellular drug concentration as well in K562 P

    ADM. Conclusion 41 ℃hyperthemia could effectively enhance the inhibition rate of chemotherapeutic drugs and partially re 2

    verse the multidrug resistance. It is suggested that hyperthemia could be used as a method to overcome multidrug resistance.

    【Keywords】 tumor ; multidrug resistance ; chemotherapy ; hyperthemia

    本课题为国家自然科学基金资助项目(编号 39570768)

    作者单位:610041 四川大学华西口腔医院口腔颌面外科(张萍

    现为上海第二医科大学附属第九人民医院博士后)

    许多研究[1 ]

    显示热疗与化疗联合使用有明显的

    增效作用 ,但这种增效作用与逆转肿瘤细胞耐药性的

    关系尚不明确。最近在研究耐药性的产生与细胞凋

    亡的关系中发现:细胞膜鞘磷脂的水解产物酰基鞘氨

    醇可作为第二信使 ,介导细胞因子和外界环境刺激诱

    导细胞凋亡 ,而耐药细胞的膜鞘磷脂水解明显低于敏

    感细胞 ,从而使肿瘤细胞逃避凋亡。热疗可以增加膜

    鞘磷脂水解 ,同时还可诱发酰基鞘氨醇的合成 ,从理

    论上为热疗逆转耐药提供了新的依据。本实验拟通

    过对耐药和敏感细胞株的体外培养 ,观察热疗对肿瘤

    细胞多药耐药基因(multidrug resistant gene ,MDR1)和

    多药耐药相关蛋白基因(multidrug resistant associated

    protein gene , MRP)表达的影响 ,以期寻找一种适用于

    临床的逆转多药耐药的方法。

    1 材料和方法

    1. 1 细胞株来源及主要材料

    人舌癌 Tca8113细胞株和耐药的白血病细胞株 K562P ADM

    (四川大学华西基础医学与法医学院分子生物学教研室提

    供) ;RNA提取试剂盒和 RT- PCR一步法试剂盒(Roche 公司 ,德国) ;CS-910色谱扫描仪(Shimadzu公司 ,日本) 。

    1. 2 实验分组

    将人舌癌 Tca8113细胞株和耐药白血病细胞株 K562P ADM

    解冻复苏 ,于含 10 %小牛血清的 RPMI1640 培养基中 ,37 ℃、5 %CO2 条件下培养。取处于对数生长期的细胞 ,调整细胞浓

    度为1×10

    6

    个P ml ,按实验分组分别接种等量细胞于 50 ml 培

    养瓶和96孔板内 ,24 h 后用于实验。实验分组:平阳霉素组

    (简称 P组) 、平阳霉素加氨甲蝶呤组(简称 PC组) 、平阳霉素

    加氨甲蝶呤加顺铂组(简称 PMC组) 、空白对照组(N组 ,加等

    量培养液) 。供试药品浓度:顺铂:3μgP ml ,平阳霉素:8μgP ml ,氨甲蝶呤:410μgP ml。加热方法为放入 41 ℃恒温水浴箱中。

    每天加热2次 ,每次2 h ,其余时间仍置于37 ℃培养。

    1. 3 MTT试验

    每个观察点设 3 个复孔 ,每天向待测的孔中加入 10μl

    · 721 · 华西口腔医学杂志 WCJS 2003年4月第21卷第2期

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.MTT溶液(5 mgP ml) ,培养4 h ,然后去除孔中上清液 ,每孔加入

    二甲基亚砜 ,终止反应后在平衡振荡器上振荡 10 min使 MTT

    的还原产物甲替完全溶解 ,最后在 EL-312e酶标仪上测量每孔

    在570 nm波长的OD值 ,用细胞抑制率表示:

    细胞抑制率( %) = [ (对照孔 OD 值 - 试验孔 OD 值)P 对

    照孔OD值] × 100 %。

    1. 4 RT- PCR法测定MDR1及MRP在 mRNA水平的表达

    加药后第2天及第5天 ,每组收集1× 10

    6

    个细胞 ,用 RNA

    提取试剂盒提取总 RNA , 2 %的琼脂糖凝胶电泳鉴定 ......