厌氧菌的药敏方法介绍.ppt
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参见附件(197kb)。
厌氧菌的药敏方法介绍
一、受试菌的准备
一、受试菌的准备
1.将受试菌纯菌接种在厌氧菌血平皿上(一般使用GAM、BHI等)，厌氧培养48h(厌氧手套箱中),厌氧罐中72h。
3. 调节浓度到0.5号McFaland管中(相当于1.5×108CFu/ml), 若用试管稀释法测MIC,则上述管应10倍稀释2次,终浓度为106 CFu /ml即可使用,若为琼脂稀释法则不宜稀释,因为点种菌一般为1-3?l,其浓度仍为1.5 × 105CFu/ml左右。
4. 也可将菌的混悬液经厌氧培养4-6h(生长缓慢菌应培养12h)，这时应注意菌的浓度，如仍在0.5号MF管内就不作处理, 超过此浓度宜作稀释后再使用。
5.每次药敏试验受试菌中应注意加入标准菌株作为质控.
①B.fragilis脆弱类杆菌(ATCC 25285或NCTC 9343)
二、抗生素的稀释和准备
1.准确称取抗生素(我们一般称取2.56g,加DW或其它液体4ml)，以对倍稀释法稀释成系列浓度2560、1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5。抗生素量的选择可据上表敏感范围作中点向上、向下各稀释5个浓度。
3.一般宜选择表1中1-2种抗生素作为质控抗生素使用。
三、培养基的准备
1.使用布氏琼脂或GAM培养基
布氏琼脂(胰酪胨10g、 动物组织蛋白酶消化物10g、酵母粉2g、葡萄糖1g、氯化纳5g、亚硫酸纳(NaHSO3)0.1g、0.5%氯化血红素1ml、1%vitk1 0.1ml、DW1000ml.pH7.0-7.2 121℃ 15min高压灭菌。
四、抗生素的MIC试验
1.取上述准备好的受试菌液0.5ml，加入灭菌瓷板槽孔中,按顺序并作标记。
五、结果观察
1. 两块无抗生素平板，需氧平板无菌生长,而厌氧平板受试菌株全部生长。
关检厌氧菌药敏的K-B(纸片法)
说明：厌氧菌的药敏试验一般不宜使 用K-B法做敏感试验，提倡使用试管或琼脂稀释法做药敏，有时为了临床需要也做K-B法, 提供临床参考。
方 法
1.纸片的制备：选用国产新华Ⅰ号滤纸，使用打孔机制备成为6mm纸片。
4.每100张制备好的滤纸片平铺在平皿上，加抗生素溶液0.5ml使其浸均，再在37℃烘干，每10片装入无菌小瓶中，用无菌橡皮塞盖紧于-20℃以下冰箱中保存。
5.每批纸片用标准菌株检测，其抑菌环在规定范围内，每批纸片对同一标准菌株抑菌环大小差别≤2mm说明抗菌纸片合格。
6.大致判断标准一般其抗菌环直径≤15为不敏感，15-20mm为中介, ≥22多为敏感。
厌氧菌的药敏方法介绍
一、受试菌的准备
一、受试菌的准备
1.将受试菌纯菌接种在厌氧菌血平皿上(一般使用GAM、BHI等)，厌氧培养48h(厌氧手套箱中),厌氧罐中72h。
3. 调节浓度到0.5号McFaland管中(相当于1.5×108CFu/ml), 若用试管稀释法测MIC,则上述管应10倍稀释2次,终浓度为106 CFu /ml即可使用,若为琼脂稀释法则不宜稀释,因为点种菌一般为1-3?l,其浓度仍为1.5 × 105CFu/ml左右。
4. 也可将菌的混悬液经厌氧培养4-6h(生长缓慢菌应培养12h)，这时应注意菌的浓度，如仍在0.5号MF管内就不作处理, 超过此浓度宜作稀释后再使用。
5.每次药敏试验受试菌中应注意加入标准菌株作为质控.
①B.fragilis脆弱类杆菌(ATCC 25285或NCTC 9343)
二、抗生素的稀释和准备
1.准确称取抗生素(我们一般称取2.56g,加DW或其它液体4ml)，以对倍稀释法稀释成系列浓度2560、1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5。抗生素量的选择可据上表敏感范围作中点向上、向下各稀释5个浓度。
3.一般宜选择表1中1-2种抗生素作为质控抗生素使用。
三、培养基的准备
1.使用布氏琼脂或GAM培养基
布氏琼脂(胰酪胨10g、 动物组织蛋白酶消化物10g、酵母粉2g、葡萄糖1g、氯化纳5g、亚硫酸纳(NaHSO3)0.1g、0.5%氯化血红素1ml、1%vitk1 0.1ml、DW1000ml.pH7.0-7.2 121℃ 15min高压灭菌。
四、抗生素的MIC试验
1.取上述准备好的受试菌液0.5ml，加入灭菌瓷板槽孔中,按顺序并作标记。
五、结果观察
1. 两块无抗生素平板，需氧平板无菌生长,而厌氧平板受试菌株全部生长。
关检厌氧菌药敏的K-B(纸片法)
说明：厌氧菌的药敏试验一般不宜使 用K-B法做敏感试验，提倡使用试管或琼脂稀释法做药敏，有时为了临床需要也做K-B法, 提供临床参考。
方 法
1.纸片的制备：选用国产新华Ⅰ号滤纸，使用打孔机制备成为6mm纸片。
4.每100张制备好的滤纸片平铺在平皿上，加抗生素溶液0.5ml使其浸均，再在37℃烘干，每10片装入无菌小瓶中，用无菌橡皮塞盖紧于-20℃以下冰箱中保存。
5.每批纸片用标准菌株检测，其抑菌环在规定范围内，每批纸片对同一标准菌株抑菌环大小差别≤2mm说明抗菌纸片合格。
6.大致判断标准一般其抗菌环直径≤15为不敏感，15-20mm为中介, ≥22多为敏感。
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